大腸桿菌DB3.1化學感受態(tài)細胞是大腸桿菌 BL21（DE3）plysS 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,，可用于DNA 的熱擊轉(zhuǎn)化,。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測本產(chǎn)品，轉(zhuǎn)化效率可達 107,。該菌株帶有質(zhì)粒plysS，具有氯霉素抗性,，此質(zhì)粒含有表達 T7 溶菌酶的基因,，T7 溶菌酶能夠降低目的基因的背景表達水平,，但不干擾 IPTG 誘導(dǎo)的表達

產(chǎn)品及特點

大腸桿菌DB3.1化學感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌 BL21 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于 DNA 的化學轉(zhuǎn)化,。本產(chǎn)品用作表達載體的宿主,，適用于毒性蛋白的表達，適用于不是基于 T7 啟動子的表達系統(tǒng),。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測,，本產(chǎn)品轉(zhuǎn)化效率可達 107。菌株基因型為：BL21 strain E.coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal

規(guī)格及成分 成分 編號 包裝
本產(chǎn)品 140428 0.1 mL×10
使用手冊 1 份

 

 

運輸及保存 干冰運輸,、-80℃保存,，有效期半年。
自備試劑 目的 DNA,、SOC 或 LB 培養(yǎng)基等
使用方法 1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中,。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為 50-100μL，可以根據(jù)
實際情況分裝使用,。
以下實驗以 50 μL 感受態(tài)細胞為例,。
2. 待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的 DNA（根據(jù)實際情況加入適量
的 DNA,，通常 100 μL 感受態(tài)細胞能夠被 1 ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和）,，用移液器
輕輕吹打混勻，冰浴 30 分鐘,。
3. 42℃熱擊 45 秒,，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘,。
4. 每個離心管中加入 450 μL 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）,，混勻后置于 37℃
搖床，150 rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘使菌體復(fù)蘇,。
5. 根據(jù)實驗需求,，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞,，加到含相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 固體
瓊脂培養(yǎng)基上,，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于 37℃直至液體被吸收,，
倒置培養(yǎng),，37℃培養(yǎng) 12-16 小時,。
大腸桿菌DB3.1化學感受態(tài)細胞注意事項：
1. 涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整,。若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板,；
若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少,，可取 200-300 μL 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆數(shù)較
少,，可通過離心（4,000 rpm,，2 分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于
平板中,。
2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,，可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存,，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,，可以將剩下的菌液再
涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。