抗SLA ELISA是一種使用人重組SLA/LP的固相酶免疫測定法用于定量和定性檢測人類可溶性肝抗原（SLA）抗體血清。

該檢測是診斷自身免疫性肝炎（AIH）的工具,。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理,，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品抗可溶性肝抗原(SLA) - IgG EIA(96孔)。產(chǎn)品僅用于科研,，不可用于臨床診斷。

抗可溶性肝抗原(SLA) - IgG EIA(96孔)應(yīng)用和檢測原理：

自身免疫性肝炎（AIH）是一種慢性進行性肝病,，其起源未知,，對免疫抑制治療反應(yīng)良好，但如果不治療則預(yù)后不佳,。因此,，早期和準(zhǔn)確的診斷非常重要。AIH的特點是缺乏病毒標(biāo)志物的情況下,，組織學(xué)上表現(xiàn)為周圍門脈性肝炎,，高γ球蛋白血癥，以及大多數(shù)患者血清中存在自身抗體,。70%的患者有顯著滴度的抗核抗體（ANA）,、平滑肌自身抗體（SMA）或肝腎微粒體自身抗體（LKM）。這些抗體對AIH具有診斷價值,，但并不特異于該疾病,，因為它們也出現(xiàn)在10-15%的病毒性肝炎和其他免疫介導(dǎo)疾病的患者中。相比之下,，針對可溶性肝抗原（SLA）和肝胰抗原（LP）的抗體是唯1特異于自身免疫性肝炎的，存在于20%的所有AIH患者中,，其中許多患者對其他自身抗體呈陰性,。研究表明，抗-SLA和抗-LP針對的是相同的抗原,，因此是相同的,。2000年克隆和測序的SLA/LP抗原是一種未知功能的蛋白質(zhì)，被認(rèn)為是一種UGA-抑制劑tRNA相關(guān)蛋白,。

ANA/SMA和抗-SLA陽性患者在大多數(shù)臨床,、生化、組織學(xué)和預(yù)后特征上是共享的,。因此,，根據(jù)自身抗體狀態(tài)區(qū)分不同的亞組在臨床上并沒有幫助。然而,，對于許多對其他自身抗體呈陰性的患者來說,，檢測抗-SLA自身抗體對于AIH的診斷非常重要，否則可能會被誤診,。

試劑盒組成：

需要重新配制的：

5倍樣本緩沖液1瓶,，20毫升 - 5倍濃縮（白色瓶蓋：黃色溶液）

成分：Tris, 氯化鈉（NaCl）, 牛血清白蛋白（BSA）, 疊d化鈉 < 0.1%（防腐劑）

50倍洗滌緩沖液1瓶,，20毫升 - 50倍濃縮（白色瓶蓋：綠色溶液）

成分：Tris, 氯化鈉（NaCl）, 吐溫20, 疊d化鈉 < 0.1%（防腐劑）

即用型：

陰性對照1瓶，1.5毫升（綠色瓶蓋：無色溶液）

成分：人血清（稀釋）, 疊D化鈉 < 0.1%（防腐劑）

陽性對照1瓶,，1.5毫升（紅色瓶蓋：黃色溶液）

成分：人血清（稀釋）, 疊D化鈉 < 0.1%（防腐劑）

截止校準(zhǔn)液1瓶,，1.5毫升（藍色瓶蓋：黃色溶液）

成分：人血清（稀釋）, 疊D化鈉 < 0.1%（防腐劑）

校準(zhǔn)液6瓶，每瓶1.5毫升,，濃度分別為0, 3, 10, 30, 100, 300 U/ml

（顏色隨濃度增加而加深：黃色溶液）

成分：人血清（稀釋）, 疊D化鈉 < 0.1%（防腐劑）

結(jié)合物1瓶,，15毫升IgG（藍色瓶蓋：藍色溶液）

成分：與辣根過氧化物酶結(jié)合的抗人M疫球蛋白

TMB底物1瓶，15毫升（黑色瓶蓋）

成分：穩(wěn)定的TMB/H2O2

停止液1瓶,，15毫升（白色瓶蓋：無色溶液）

成分：1M鹽酸

微孔板12x8孔條,，帶有可拆卸的微孔

涂覆請參見第1段。

檢測程序

移液前的準(zhǔn)備

稀釋濃縮試劑：

將濃縮樣本緩沖液按1:5的比例用蒸餾水稀釋（例如20毫升加80毫升）,。

將濃縮洗滌緩沖液按1:50的比例用蒸餾水稀釋（例如20毫升加980毫升）,。

樣本：

將血清樣本按1:101的比例用樣本緩沖液（1倍）稀釋

例如：1000微升樣本緩沖液（1倍）+ 10微升血清。充分混合,！

洗滌：

每8個孔準(zhǔn)備20毫升稀釋洗滌緩沖液（1倍）,，或每96個孔準(zhǔn)備200毫升

例如：4毫升濃縮液加196毫升蒸餾水。

自動洗滌：

考慮設(shè)置儀器和機器人移液器死體積所需的額外體積,。

手動洗滌：

將孔中的液體倒空,，然后將微孔板倒置在干凈的吸水紙上，用力敲擊以去除液體,。向每個孔中加入300微升稀釋洗滌緩沖液,，等待20秒。重復(fù)整個程序兩次,。

微孔板：

計算測試所需的孔數(shù),。從框架中移除未使用的孔，放回提供的塑料袋中,，與干燥劑一起密封（2-8°C/35-46°F）,。

工作流程

有關(guān)移液方案，請參見附錄A,，有關(guān)測試程序,，請參見附錄B

我們建議對樣本和校準(zhǔn)液進行雙重移液。

截止校準(zhǔn)液僅用于定性測試,。

● 將100微升每位患者的稀釋血清移入z定的微孔中,。

● 將100微升校準(zhǔn)液或截止校準(zhǔn)液以及陰性和陽性對照移入z定的孔中。

● 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分鐘,。

● 用300微升稀釋洗滌緩沖液（1:50）洗滌3次,。

● 向每個孔中加入100微升結(jié)合物。

● 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分鐘,。

● 用300微升稀釋洗滌緩沖液（1:50）洗滌3次,。

● 向每個孔中加入100微升TMB底物,。

● 在20-32°C/68-89.6°F下，避免強烈光線照射,，孵育30分鐘,。

● 按照加入底物的相同順序，向每個孔中加入100微升停止液,。

● 孵育至少5分鐘,。

● 輕輕搖動板子5秒鐘。

● 在30分鐘內(nèi)讀取450納米（可選450/620納米）處的吸光度,。

文獻參考：

1.KrawittEL(1996).

AutoimmuneHepatitis.

NEnglJMed334:897-903.

2.MeyerzumBüschenfeldeKH,LohseAW(1995).

AutoimmuneHepatitis.

NEnglJMed333:1004-1005.

3.AlvarezF,BergPA,Bianchietal.(1999).

InternationalAutoimmuneHepatitisGroupReport:areviewofcriteriafordiagnosisofauto-

immunehepatitis.

JHepatol31:929-938.

4.CostaM,Rodriguez-SanchezJL,CzajaAJ,GelpiC(2000).

IsolationandcharacterizationofcDNAencodingtheantigenicproteinofthehumantRNP(Ser

Sec)complexrecognizedbyautoantibodiesfrompatientswithtype-1hepatitis.

ClinExpImmunol121:364-374.

ALPCO產(chǎn)品種類多樣,，可測樣品來源包括人、大/小鼠,、豚鼠,、兔、豬,、羊,、狗、猴等,，涉及神經(jīng)生物學(xué),、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激,、細胞因子與信號轉(zhuǎn)導(dǎo),、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué),、甲狀腺功能,、腸胃病學(xué)、免疫學(xué),、生殖激素、抗體和抗原,、分子診斷等多個研究領(lǐng)域,，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

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