Assay Genie脂肪酸氧化檢測試劑盒是一種高靈敏度的比色法檢測試劑盒,，用于定量檢測細(xì)胞和組織中的脂肪酸氧化。這種特別的檢測方法使用了高溶解性的辛酰輔酶A（Octanoyl-CoA）底物,，能夠比長鏈且溶解性較差的底物（例如18碳不飽和脂肪酸油酸）更準(zhǔn)確地測量脂肪酸氧化,。

作為Assay Genie全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Assay Genie銷售產(chǎn)品脂肪酸氧化（FAO）檢測試劑盒,。產(chǎn)品僅用于科研,，不可用于臨床診斷。

脂肪酸氧化（FAO）檢測試劑盒：

產(chǎn)品名稱：脂肪酸氧化檢測  

貨號：BR00001  

應(yīng)用范圍：定量檢測細(xì)胞和組織中的脂肪酸氧化,。  

注意事項：僅供研究使用,。

細(xì)胞/組織提取物的制備

步驟| 操作  

步驟1| 用冰冷的磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌約10?個細(xì)胞兩次，并w全去除細(xì)胞沉淀中的PBS,。細(xì)胞沉淀應(yīng)保存在-80℃,。組織樣本應(yīng)c底用PBS洗滌以去除可能引起結(jié)果不一致的血細(xì)胞。  

步驟2| 用冰冷的去離子水（dH?O）稀釋10倍細(xì)胞裂解液,，制備足夠的1倍細(xì)胞裂解液,。向細(xì)胞沉淀中加入50-100微升冰冷的1倍細(xì)胞裂解液，通過上下移液（輕柔但c底）提取細(xì)胞,。將裂解液置于冰上,，間歇性輕柔振蕩5分鐘。如果裂解液黏稠,，可加入更多1倍細(xì)胞裂解液并重復(fù)移液,。在低溫離心機中以最大速度離心裂解液5分鐘，收集上清液用于檢測,。組織樣本在1倍細(xì)胞裂解液中勻漿,，并通過離心澄清裂解液。每0.5毫升1倍細(xì)胞裂解液用于勻漿約25毫克組織,。  

步驟3| 進(jìn)行蛋白定量檢測以確定樣本蛋白濃度,。通過用冰冷的1倍細(xì)胞裂解液稀釋，將樣本蛋白濃度調(diào)整至1-3毫克/毫升,。始終將蛋白樣本保存在冰上,。凍融后的粗蛋白裂解液可能會降低酶活性。裂解液應(yīng)保存在-80℃。

注意：不要使用含有還原劑或SDS的緩沖液,。

試劑解凍

將解凍后的脂肪酸氧化（FAO）檢測液和20倍FAO底物置于冰上,。在移液前輕輕振蕩溶液。盡量減少試劑解凍的時間,，使用后立即冷凍保存,。

對照液和反應(yīng)液的制備

-對照液：將1份去離子水（dH?O）與20份FAO檢測液混合，例如25微升去離子水與500微升FAO檢測液混合,。檢測過程中將新制備的對照液置于冰上保存,。  

-反應(yīng)液：將1份20倍FAO底物與20份FAO檢測液混合，例如25微升20倍FAO底物與500微升FAO檢測液混合,。將溶液置于冰上并立即使用,。每個蛋白樣本分別用50微升對照液和50微升反應(yīng)液處理。

試劑盒描述  

脂肪酸提供的ATP比碳水化合物（如葡萄糖）更多,。在能量需求高的組織（如心臟組織）中,，高達(dá)50-70%的能量來自脂肪酸β-氧化，該過程將脂肪酸轉(zhuǎn)化為乙酰輔酶A,，同時在線粒體中產(chǎn)生FADH?和NADH,。

這種嚴(yán)格的需氧氧化途徑包括四個不同的步驟：  

1. 由酰基輔酶A脫氫酶催化的?；o酶A脫氫反應(yīng),；  

2. 由烯酰輔酶A水合酶催化的水合反應(yīng)；  

3. 由3-羥基?；o酶A脫氫酶催化的脫氫反應(yīng),；  

4. 由β-酮硫解酶催化的硫解反應(yīng)。

脂肪酸β-氧化系統(tǒng)在人類中的重要性體現(xiàn)在存在一組遺傳性疾病,，稱為脂肪酸氧化障礙（FAODs）,。這是一組脂肪酸轉(zhuǎn)運和氧化缺陷的異質(zhì)性疾病，以常染色體隱性方式遺傳,，具有廣泛的臨床表現(xiàn),。

證據(jù)表明，胎兒發(fā)育過程中脂肪酸氧化（FAO）活性的調(diào)節(jié)不僅對胎兒生命至關(guān)重要,，還對成年期的健康和疾病有影響,。脂肪酸氧化活性的測量為許多疾病的病理生理學(xué)和代謝基礎(chǔ)提供了寶貴的見解。

Assay Genie的非放射性脂肪酸氧化檢測基于辛酰輔酶A底物的氧化,。NADH的生成與四氮雜唑鹽INT的還原偶聯(lián),，形成紅色的甲臜。紅色甲臜的強度與脂肪酸氧化活性的增加成正比,。

檢測液和底物應(yīng)分裝后保存在-80℃,。

Assay Genie旗下涵蓋了15種種屬的高品質(zhì)的ELISA試劑盒及多種抗體，可檢測的指標(biāo)種類豐富，覆蓋免疫,、代謝和分子等多種研究領(lǐng)域,，是科學(xué)研究中便捷的小助手。  

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