C-反應(yīng)蛋白（CRP）ELISA是一種測(cè)定CRP的定量免疫測(cè)定法在人血清中,。僅供研究使用。不用于診斷或治療程序,。

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C-反應(yīng)蛋白ELISA檢測(cè)原理：

CRP ELISA是一種兩步捕獲或“夾心"類型的免疫分析法,。該分析法利用兩種高度特異性的單克隆抗體：一種針對(duì)CRP的單克隆抗體被固定在微孔板上,，另一種針對(duì)CRP不同表位的單克隆抗體與辣根過(guò)氧化物酶（HRP結(jié)合物）結(jié)合。在第一次孵育步驟中,，樣品,、校準(zhǔn)品和對(duì)照品中存在的CRP被固定在微孔板上的抗體所結(jié)合。通過(guò)洗滌步驟去除多余的未結(jié)合物質(zhì),。在第二次孵育步驟中,，添加HRP結(jié)合的抗體（HRP結(jié)合物），它特異性地結(jié)合到任何固定的CRP上,，從而形成一個(gè)夾心復(fù)合物,。通過(guò)洗滌步驟去除未結(jié)合的HRP結(jié)合物,。接下來(lái)，添加TMB底物（酶底物）,，它與HRP反應(yīng)形成一種與CRP含量成正比的藍(lán)色產(chǎn)物,。通過(guò)添加終止液來(lái)終止酶促反應(yīng)，將顏色從藍(lán)色變?yōu)辄S色,。在450納米處的微孔板讀取器上測(cè)量吸光度,。使用一組校準(zhǔn)品繪制校準(zhǔn)曲線，從中可以直接讀取樣品和對(duì)照品中CRP的含量,。

樣本收集與儲(chǔ)存：

血清：每次重復(fù)測(cè)定需要大約0.1毫升的血清,。收集4-5毫升靜脈血放入適當(dāng)標(biāo)記的試管中，并讓其在室溫下凝固,。在室溫下離心,，小心地將血清層轉(zhuǎn)移到新的標(biāo)記儲(chǔ)存管中。血清樣本可以在2-8°C下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)24小時(shí),，或者在-10°C或更低的溫度下儲(chǔ)存,，以便稍后進(jìn)行分析。將所有人類樣本視為可能的生物危害物質(zhì),，并在處理時(shí)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施,。

需要但未提供的試劑和設(shè)備

1. 校準(zhǔn)的單通道移液器，用于分配10微升,、20微升和190微升,。

2. 校準(zhǔn)的多通道移液器，用于分配50微升,、100微升,、200微升和300微升（如果手動(dòng)洗滌）。

3. 自動(dòng)微孔板洗滌器（推薦使用）,。

4. 一次性移液器槍頭,。

5. 蒸餾水或去離子水。

6. 微孔板振蕩器：

a. 軌道振蕩器（3毫米直徑）,，設(shè)置為600轉(zhuǎn)/分鐘,；

b. 往復(fù)振蕩器（1.5英寸行程長(zhǎng)度），設(shè)置為每分鐘180次振蕩,。

7. 校準(zhǔn)的微孔板讀取器,，配備450納米濾光片，上OD限為3.0或更高,。

8. 聚丙烯/高密度聚乙烯或一次性玻璃管用于樣本預(yù)處理,。

9. 計(jì)時(shí)器。

10. 渦旋混合器。

典型校準(zhǔn)器曲線：僅采樣曲線,。請(qǐng)勿用于計(jì)算結(jié)果,。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人,、大/小鼠、豚鼠,、兔,、豬、羊,、狗,、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué),、骨代謝,、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),、糖尿病和肥胖癥,、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能,、腸胃病學(xué),、免疫學(xué)、生殖激素,、抗體和抗原,、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長(zhǎng),。

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