酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法技術(shù)，ELISpot

是一種用于在單細(xì)胞水平上對(duì)分泌細(xì)胞因子或免疫球蛋白的細(xì)胞進(jìn)行定量的靈敏分析方法,。細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子,、免疫球蛋白或其他靶蛋白在分泌后立即被特異性抗體捕獲，并在整個(gè)刺激過程中被持續(xù)捕獲。ELISpot可以在25萬個(gè)細(xì)胞中檢測(cè)出一個(gè)有響應(yīng)的細(xì)胞,，是zui靈敏的細(xì)胞分析方法之一,。該檢測(cè)方法穩(wěn)健且易于操作，因此既適用于大規(guī)模試驗(yàn),，也適用于實(shí)用研究,。ELISpot已被廣泛應(yīng)用于研究感染性疾病、癌癥,、過敏和自身免疫性疾病的特異性免疫反應(yīng),， 。

ELISpot實(shí)驗(yàn)步驟與原理示意 （示意圖如下）

大致原理上分為如下7個(gè)步驟,，詳情已具體產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)

Step.1 包被：將單克隆捕獲抗體添加到乙醇處理的PVDF膜板上

Step.2 細(xì)胞孵育：在有刺激的情況下加入細(xì)胞,，孵育，細(xì)胞分泌細(xì)胞因子

Step.3 捕獲分泌物：激活后的細(xì)胞,，分泌的細(xì)胞因子被周圍的抗體結(jié)合捕獲

Step.4 檢測(cè)抗體：去除細(xì)胞,，清洗平板，加入生物素化的檢測(cè)抗體

Step.5 鏈霉親和素-酶偶聯(lián)物：加入鏈霉親和素偶聯(lián)物,，保證后續(xù)在膜上形成斑點(diǎn)

Step.6 加反應(yīng)底物：當(dāng)酶催化時(shí),，顯色底物形成不溶性沉淀

Step.7 結(jié)果分析：在自動(dòng)點(diǎn)閱讀器中對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。每個(gè)斑點(diǎn)對(duì)應(yīng)一個(gè)分析物分泌細(xì)胞

來源：艾美捷

ELISpot通常用于哪些領(lǐng)域呢,？

ELISpot常見的領(lǐng)域包括：T細(xì)胞/B細(xì)胞功能研究,、自身免疫檢測(cè)、 疫苗和藥品的研發(fā)與檢測(cè),、腫瘤研究,、傳染病的研究和檢測(cè)、病毒研究等,。下面簡(jiǎn)單講述一下T細(xì)胞,，B細(xì)胞的ELISpot分析應(yīng)用：

T細(xì)胞的ELISpot

ELISpot是研究特異性免疫反應(yīng)的敏感方法，能夠區(qū)分活化的T細(xì)胞亞群,。例如,，Th1細(xì)胞產(chǎn)生干擾素-γ、IL-2和TNF-α,，而Th2細(xì)胞產(chǎn)生其他細(xì)胞因子,，如IL-4、IL-5和IL-13,。例如,，這被廣泛應(yīng)用于傳染病、癌癥,、過敏和自身免疫性疾病的研究,。

在疫苗研究中,，E

LISpot是一種標(biāo)準(zhǔn)工具,，用于通過測(cè)量激發(fā)強(qiáng)大T細(xì)胞反應(yīng)的能力(通常是干擾素-γ的分泌)來確定疫苗的有效性,。今天，基于ELISpot的診斷分析已經(jīng)可用,，包括一種通過測(cè)量T細(xì)胞對(duì)結(jié)核分枝桿菌特定抗原的反應(yīng)分泌干擾素-γ來檢測(cè)結(jié)核病感染患者的測(cè)試,。

B細(xì)胞的ELISpot

B細(xì)胞ELISpot分析是分析抗體免疫反應(yīng)的有力工具，并且是僅有的少數(shù)能直接聚焦于 抗體分泌細(xì)胞（ASC）的分析方法之一,。 這種J為靈敏的方法使研究人員能夠識(shí)別樣 品中的ASC,，并測(cè)量其總數(shù)以及那些對(duì)特定抗原分泌抗體的數(shù)量。

例如,，B細(xì)胞ELISpot可以揭示血液中長(zhǎng)期記憶B細(xì)胞的數(shù)量,，這是無法用其他方法評(píng) 估的。B細(xì)胞ELISpot的主要應(yīng)用包括檢測(cè)B細(xì)胞對(duì)感染的反應(yīng)和疫苗引發(fā)的反應(yīng),。

如何挑選合適的ELISpot研究工具,？

針對(duì)不同的研究需要，使用不同格式的ELISpot試劑盒,，從ELISpotBASIC到完整的ELISpotPRO試劑盒,。

分析物（指標(biāo)）與種屬的對(duì)應(yīng)表格（如下指標(biāo)均有對(duì)應(yīng)產(chǎn)品）：

* 以上僅適用于科學(xué)研究使用.來源：艾美捷