在進(jìn)行流式細(xì)胞儀多色分析時(shí)，如果想得到理想的分析結(jié)果,，就需要選擇好抗體的熒光搭配,。常考慮的影響因素有以下幾點(diǎn)：

1.熒光素的熒光強(qiáng)度：

一個(gè)特定抗體,，能否區(qū)分陰性與陽性結(jié)果,，靠的是抗體上結(jié)合的熒光素標(biāo)記。每一種熒光素的光量子釋放能力不同,，相對(duì)熒光強(qiáng)度不一樣,，一般用染色指數(shù)（staining index）來比較不同熒光標(biāo)記的光信號(hào)強(qiáng)度。染色指數(shù)是陽性信號(hào)和陰性信號(hào)差異與陰性峰分布寬度比值,，是判斷該熒光染料辨別弱陽性表達(dá)的能力,。因此，對(duì)于特定的單克隆抗體,，由于使用了不同的熒光素標(biāo)記,，其陰性細(xì)胞核陽性細(xì)胞的S/N比值（信噪比）可以相差4-6倍。一般來講,，熒光信號(hào)由強(qiáng)到弱的的排序是：PE>APC>PE-Cy5>PERCP-Cy5.5>FITC>PERCP,。

2.熒光素標(biāo)記效率：

抗體上標(biāo)記熒光素的數(shù)量（F/P）值也會(huì)影響相對(duì)熒光強(qiáng)度。每一個(gè)抗體上可標(biāo)記幾個(gè)FITC或PERCP分子（通常為2-9個(gè)）,，而APC和PE的標(biāo)記量約為每個(gè)抗體標(biāo)記一個(gè)熒光分子,。FITC為小分子化合物，而PE,，PERCP和APC則是分子量較大的熒光蛋白,。受熒光標(biāo)記物的化學(xué)性質(zhì)要求限制，IGM型抗體通常只用小分子的熒光素進(jìn)行標(biāo)記,，如FITC,、TEXAS RED、Cy3和Cy5,。

3.抗原表達(dá)豐度：

高表達(dá)的抗原幾乎可以用任何熒光素標(biāo)記的抗體檢測(cè),，而較低表達(dá)的抗原則需要用較高亮度的熒光素標(biāo)記的抗體進(jìn)行檢測(cè)，從而達(dá)到有效區(qū)分陽性細(xì)胞群和陰性細(xì)胞的目的,。

4.細(xì)胞自發(fā)熒光：

每個(gè)細(xì)胞群體都帶有不同水平的自發(fā)熒光,，由于細(xì)胞的自發(fā)熒光在高波長范圍里（>600nm）迅速降低，所以在檢測(cè)自發(fā)熒光水平高的細(xì)胞時(shí),，使用發(fā)射波長較長的熒光染料（比如APC）可以得到較好的檢測(cè)結(jié)果,。

5.非特異性結(jié)合

有些熒光標(biāo)記的抗體會(huì)表現(xiàn)出低水平的非特異性結(jié)合，就會(huì)造成陰性細(xì)胞的熒光水平升高,。

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