小G蛋白活化檢測(cè)試劑盒,，性價(jià)比*

時(shí)間：2019/2/20閱讀：273

近年來研究發(fā)現(xiàn)小G蛋白,，特別是一些原癌基因表達(dá)產(chǎn)物有著廣泛的調(diào)節(jié)功能,。Ras蛋白主要參與細(xì)胞增殖和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo);Rho蛋白對(duì)細(xì)胞骨架網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)成發(fā)揮調(diào)節(jié)作用;Rab蛋白則參與調(diào)控細(xì)胞內(nèi)膜交通(membrane traffic),。

此外，Rho和Rab亞家庭可能分別參與淋巴細(xì)胞極化(polarization)和抗原的提呈,。某些信號(hào)蛋白通過SH-3功能區(qū)將酪氨酸激酶途徑同一些由小G蛋白所控制的途徑連接起來,，如Rho(與Ras有30%同源性)調(diào)節(jié)胞漿中微絲上肌動(dòng)蛋白的聚合或解離，從而影響細(xì)胞形態(tài),。這一事實(shí)解釋了某些含有SH-3的蛋白同細(xì)胞骨架某些成份相關(guān)聯(lián)或調(diào)節(jié)它們的功能,。

在細(xì)胞中存在著一些專門控制小G蛋白活性的小G蛋白調(diào)節(jié)因子，有的可以增強(qiáng)小G蛋白的活性,，如鳥苷酸交換因子（guanine nucleotide exchange factor, GEF）和鳥苷酸解離抑制因子（Guanine nucleotide dissociation Inhibitor, GDI）,，有的可以降低小G蛋白活性，如GTP酶活化蛋白（GTPase activating protein, GAP）,。

個(gè)被發(fā)現(xiàn)的小G蛋白是Ras,，它是Ras基因的產(chǎn)物。小G蛋白的Ras超家族由超過150個(gè)成員組成,，基于它們的序列同源性,，被分成若干亞家族，例如Rho，Ras,，Ran,，Rab，Arf和Rad / Rem / Gem / Kir,。

小G蛋白超家族成員及其相關(guān)功能：

Ras	細(xì)胞增殖	DIRAS1; DIRAS2; DIRAS3; ERAS; GEM; HRAS; KRAS; MRAS; NKIRAS1; NKIRAS2; NRAS; RALA; RALB; RAP1A; RAP1B; RAP2A; RAP2B; RAP2C; RASD1; RASD2; RASL10A; RASL10B; RASL11A; RASL11B; RASL12; REM1; REM2; RERG; RERGL; RRAD; RRAS; RRAS2
Rho	細(xì)胞骨架的動(dòng)力與形態(tài)	RHOA; RHOB; RHOBTB1; RHOBTB2; RHOBTB3; RHOC; RHOD; RHOF; RHOG; RHOH; RHOJ; RHOQ; RHOU; RHOV; RND1; RND2; RND3; RAC1; RAC2; RAC3; CDC42
Rab	膜轉(zhuǎn)運(yùn)	RAB1A; RAB1B; RAB2; RAB3A; RAB3B; RAB3C; RAB3D; RAB4A; RAB4B; RAB; RAB5B; RAB5C; RAB6A; RAB6B; RAB6C; RAB7A; RAB7B; RAB7L1; RAB8A; RAB8B; RAB9; RAB9B; RABL2A; RABL2B; RABL4; RAB10; RAB11A; RAB11B; RAB12; RAB13; RAB14; RAB15;RAB17; RAB18; RAB19; RAB20; RAB21; RAB22A; RAB23; RAB24; RAB25; RAB26; RAB27A; RAB27B; RAB28; RAB2B; RAB30; RAB31; RAB32; RAB33A; RAB33B; RAB34; RAB35; RAB36; RAB37; RAB38; RAB39; RAB39B; RAB40A; RAB40AL;RAB40B; RAB40C; RAB41;RAB42; RAB43
Rap	細(xì)胞粘附	RAP1A; RAP1B; RAP2A; RAP2B; RAP2C
Arf	囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)	ARF1; ARF3; ARF4; ARF5; ARF6; ARL1; ARL2; ARL3; ARL4; ARL5; ARL5C; ARL6; ARL7; ARL8; ARL9; ARL10A; ARL10B; ARL10C; ARL11; ARL13A; ARL13B; ARL14; ARL15; ARL16; ARL17; TRIM23, ARL4D; ARFRP1; ARL13B
Ran	核運(yùn)輸	RAN
Rheb	mTOR途徑	RHEB; RHEBL1
RGK		RRAD; GEM; REM; REM2
Rit		RIT1; RIT2
Miro	線粒體轉(zhuǎn)運(yùn)	RHOT1; RHOT2

Ras蛋白主要參與細(xì)胞增殖和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)；Rho蛋白對(duì)細(xì)胞骨架網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)成發(fā)揮調(diào)節(jié)作用,；Rab蛋白則參與調(diào)控細(xì)胞內(nèi)膜交通（membrane traffic）,，其他家族成員也在細(xì)胞信號(hào)通路中發(fā)揮著非常重要的作用。

因此,，研究GTP酶（GTPase）的活化調(diào)控機(jī)制具有廣泛而深遠(yuǎn)的生物學(xué)意義,。

傳統(tǒng)檢測(cè)Rho 蛋白活化水平的方法主要為pull-down檢測(cè)。pull-down法往往存在耗時(shí)長(zhǎng),、需要樣本量大,、不太適合高通量檢測(cè)等缺點(diǎn)。為克服傳統(tǒng)方法這些方面的缺點(diǎn),，Cytoskeleton公司開發(fā)了新一代的G-LISA™檢測(cè)方法,，用于快速簡(jiǎn)便地檢測(cè)GTP酶活化水平。

G-LISA實(shí)驗(yàn)原理及操作步驟

1.首先將效應(yīng)蛋白的受體結(jié)合域（RBD）包被96孔板,；

2.樣本中GTP(活化狀態(tài))結(jié)合形式的蛋白分子則可結(jié)合到板上,，而GDP(無活性狀態(tài))結(jié)合形式蛋白則不結(jié)合；

3.洗去未結(jié)合的蛋白,；

4.然后依次加入特異性的一抗和HRP-二抗進(jìn)行孵育結(jié)合,；

5.后利用合適的酶底物OPD或化學(xué)發(fā)光試劑顯色。

Swiss 3T3 細(xì)胞中,，Activators活化的Rho蛋白（左）和Rac蛋白（右）

傳統(tǒng)Pull down法和G-LISA法的比較

原理	用包被效應(yīng)蛋白的親和磁珠選擇性的結(jié)合有活性的GTPase,，用western blot檢測(cè)信號(hào)	用包被效應(yīng)蛋白的96孔板選擇性的結(jié)合有活性的GTPase 用ELISA檢測(cè)信號(hào)
實(shí)驗(yàn)設(shè)備	SDS-PAGE、Western blot相關(guān)儀器	ELISA相關(guān)儀器
上樣量	300 - 2000 µg per assay	5 - 50 µg per assay
樣品數(shù)量	Up to 10 samples	Up to 96 samples (or more)
結(jié)果定量	WB具有很窄的線性范圍,。此外,，樣品的多次操作也會(huì)導(dǎo)致某種程度上的變異分析。	提供定量的數(shù)字讀數(shù)
反應(yīng)時(shí)間	10-12h	＜3h

G-LISA法對(duì)比傳統(tǒng)的pull down,，主要有操作簡(jiǎn)便,、上樣量少、可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣本,、反應(yīng)時(shí)間短,、定量結(jié)果準(zhǔn)確、與小鼠,、大鼠和人的組織和細(xì)胞兼容等優(yōu)勢(shì),。

小G蛋白活化檢測(cè)試劑盒Pull-down實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示：

Lanes 4 & 5:10 ng/ ml of EGF， 2min

Lanes 2 & 3: Persistent serum starvation

Lanes 1: 20 ng of recombinant Rac1-His protein run as a western blot standard

小G蛋白活化檢測(cè)試劑盒G-LISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示：

分別用CN01（藍(lán)色Activators）和LPA（紅色）處理后RhoA的活化進(jìn)程

小G蛋白活化檢測(cè)試劑盒,，性價(jià)比*

會(huì)員登錄

收藏該商鋪

提示