蛋白酶K (Merck原裝）1245680100

蛋白酶K (Merck原裝）1245680100

說明：枯草蛋白酶類高活性蛋白酶，生物實(shí)驗(yàn)室常用酶之一,。該酶在較廣的pH范圍內(nèi)(pH4-12.5)均有活性,。用于mRNA和DNA與蛋白質(zhì)的分離。

活力：40mAnsom u/mg
性狀：粉末,，是一種非特異性,、枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶，來源于白色念球菌（. Tritirachium album. ）,，具有很高的比活性,。EDTA等鰲合劑或SDS等去垢劑不能使蛋白酶K失活，反而增強(qiáng)和穩(wěn)定酶活性,，并在較廣的PH范圍內(nèi)（PH4-12.5）均有活性,。在組織或細(xì)胞核酸分離時，使核酸酶（RNA和DNA）以及反應(yīng)中其他酶失活,。
用途：生化研究,。廣譜蛋白酶，95C加熱10分鐘,，則*失活,。可替代DEPC處理RNA抽提用的離心管和 頭,，實(shí)現(xiàn)滅活RNase A的目的,，也用于處理RNase-Free的水。充分降解組織或細(xì)胞中蛋白質(zhì)分子特別是核酸,，以達(dá)到釋放和萃取高質(zhì)量核酸的輔助試劑。用于質(zhì)?；蚧蚪MDNA,、RNA的分離以及蛋白多肽印跡實(shí)驗(yàn)。

蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解,。從林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中純化得到。該酶有兩個ca2+結(jié)合位點(diǎn),，它們離酶的活性中心有一定距離,，與催化機(jī)理并無直接關(guān)系。然而,，如果從該酶中除去ca2+,，由于出現(xiàn)遠(yuǎn)程的結(jié)構(gòu)變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì),。所以,，蛋白酶k消化過程中通常加入edta（以抑制依賴于mg2+的核酸酶的作用）。但是,，如果要消化對蛋白酶k具有較強(qiáng)耐性的蛋白,，如角蛋白一類，則可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的緩沖液,。在消化完畢后,、純化核酸前要加入EGTA（ph8.0）至終濃度為2mmol/l,以鰲合ca2+。
蛋白酶K,，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶,。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性,。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定,，還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力，因而它應(yīng)用很廣泛,，包括制備脈沖電泳的染色體DNA,，蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml,。在較廣的pH范圍內(nèi)（pH 4-12.5）均有活性,。
推薦反應(yīng)緩沖液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。
蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)：20mg/ml蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)（proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,，輕輕搖動,，直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合,。加水定容到10ml,，然后分裝成小份貯存于-20℃。

蛋白酶k的作用
值得注意的是,，蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會,提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高,、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片的脫落,細(xì)胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果.EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問題,并能達(dá)到理想的染色效果.

孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃,，孵育時間為15分鐘至48小時,；理想孵育時間為2小時。