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適合用于原代細胞和干細胞的培養(yǎng)
內(nèi)毒素含量極低 <3EU/ml(規(guī)定:特級胎牛血清<10 EU/ml)
極利于細胞的生長和傳代 ,適合各種細胞培養(yǎng)
七次無菌過濾,,Z后三次為0.1 µm無菌過濾處理
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優(yōu)勢產(chǎn)品Noverse南美胎牛血清杭州現(xiàn)貨?
適合用于常規(guī)細胞原代細胞以及干細胞的培養(yǎng)
內(nèi)毒素含量極低 <3EU/ml(規(guī)定:特級胎牛血清<10 EU/ml)
極利于細胞的生長和傳代 ,,適合各種細胞培養(yǎng)
七次無菌過濾,zui后三次為0.1 µm無菌過濾處理
進行細菌,、真菌,、支原體、病毒及病毒抗體檢測,,符合動物協(xié)會要求
細胞介紹
該細胞對乳汁珠和激活的紅細胞有吞噬作用,,無表面和胞質(zhì)免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA誘導(dǎo)單核細胞分化,。
細胞特性
1. 來源:急性單核細胞白血病,,單核細胞
2. 形態(tài):單核細胞,懸浮
細胞培養(yǎng)步驟
【細胞貨號】 C5003
【細胞縮寫】 RAW 264.7細胞
【細胞名稱】 RAW 264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)
【背景資料】 此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤,。 sIg-, Ia-抗原,、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒,,XC斑點形成試驗陰性,。 可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖,。 可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。 LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用,。
【組織來源】 Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤,;單核細胞;巨噬細胞
【細胞形態(tài)】 不規(guī)則圓形
【細胞特性】 貼壁
【細胞活力】 95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
【細胞檢測】 細胞不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌
【培養(yǎng)條件】 詳見細胞說明書
【傳代方法】 建議1:2-1:3 兩天換液一次
【凍存條件】 詳見細胞說明書
【主要文獻】 請具體查閱相關(guān)發(fā)表文章
血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,,怎么處理?
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白,。這是正常特性,不會影響產(chǎn)品性質(zhì),。要除去沉淀,,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解,。所以,,使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失,。
如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?
按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:
(1)解凍血清時,,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,,減少沉淀的發(fā)生,。
(2) 血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),,使溫度與成分均一,。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀,。
(4) 勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,,從而影響血清的品質(zhì)。
(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,,若非必要,,可以無須做此步驟,。
(6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,,30分鐘的原則,,并且隨時搖晃均勻,。溫度過高,,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多,。
培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,,可長期保存嗎?
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它,。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解,。
為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件,,刺激平滑肌收縮,,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞,。在免疫學(xué) 研究,,培養(yǎng)ES細胞、平滑肌細胞時,,推薦使用熱滅活血清,。
有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,,而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,,沉淀物的形成會顯著的增多,,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,,使研究者誤認為是微生物 的分裂擴增,。
若非必須,可以不需要做熱處理這一步,。不但節(jié)省時間,,更確保血清的質(zhì)量!
細胞培養(yǎng) 中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理?
一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成,,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,,然后,,在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài),黑點是否游動,。如果細胞被污染,,微生物則會大量繁殖,培養(yǎng)基就會迅速變黃,、變混濁,。污染包括細菌污染、支原體污染等,。
如果在鏡下觀察細胞,,生長狀態(tài)良好,與黑點出現(xiàn)前相比,,沒有任何變化,,那么,黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):
(1)細胞生長過老,,破碎的細胞殘骸;
(2)血清質(zhì)量不好,,反復(fù)凍融的結(jié)果;
(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細胞生長;
(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì),、容器不合格,。可應(yīng)用離心,、過濾的方法去除這些黑點;
(5)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點,,可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除,。
細胞培養(yǎng)中如何防止黑點生成?
(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù),。
(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴。
(3) 培養(yǎng)基保持PH值7.0- 7.2,。
(4) 嚴格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),,容器定期刷洗。
(5) 掌握細胞傳代的時機,,細胞切勿生長過老,。
適合用于常規(guī)細胞原代細胞的培養(yǎng)
內(nèi)毒素含量極低 <3EU/ml(規(guī)定:特級胎牛血清<10 EU/ml)
極利于細胞的生長和傳代 ,適合各種細胞培養(yǎng)
七次無菌過濾,,zui后三次為0.1 µm無菌過濾處理
進行細菌,、真菌、支原體,、病毒及病毒抗體檢測,,符合動物協(xié)會要求
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,,且血清組成及含量常隨供血動物的性別,、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異,。血清中含有各種血漿蛋白,、多肽、脂肪,、碳水化合物,、生長因子,、激素,、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的
牛血清是細胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基,,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能,。
1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素,,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物,。
2. 提供結(jié)合蛋白,,能識別維生素、脂類,、金屬和其他激素等,,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,,起到解毒作用,。
4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源,。
5.起酸堿度緩沖液作用,。
6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,,保護細胞不受傷害,。
1、如發(fā)現(xiàn)血清渾濁,,不透明,,含許多沉淀物,說明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性,,若棕紅色,,說明血清中的血紅蛋白含量太高,,有溶血現(xiàn)象。
2,、總蛋白含量
胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,,數(shù)值偏高,說明采血的牛齡偏大,,不是胎牛,,數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了,。
3,、血紅蛋白
標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,顏色越紅,,數(shù)值越高,,反之,數(shù)值越低,。
4,、pH
國產(chǎn)血清,大多高于7.5,,進口胎牛血清,,大多低于7.5,具體原因未知,,可能和牛齡有關(guān),,這也能用來初步鑒別血清的來源。
5,、微生物
包括細菌,、霉菌、支原體,、噬菌體,、各類病原性病毒等。隨著國內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高,,細菌,、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制,支原體經(jīng)過0.1um過濾,,大多也能清除,。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴重的,主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入,,又無法過濾,,很難*清除,但對血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒,,特別是BVDV,,在國產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,這類微生物是影響國產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一,,而進口胎牛血清中基本都控制的很好,。
6. 免疫球蛋白
國產(chǎn)血清的只是定性檢測,結(jié)果也很不準(zhǔn)確,,進口胎牛血清大多定量檢測,。免疫球蛋白的數(shù)值能*體現(xiàn)出采血的時的牛齡情況,國產(chǎn)血清,,基本都是新生牛的,,血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高,,進口胎牛血清,,不含IgM,IgG的含量也較低,。
不管是國產(chǎn)還是進口血清,,都是不測抗生素的(無四環(huán)素胎牛血清除外),。國外,,抗生素的使用很嚴格,用量也很少,,每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以溯源的,,因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低;國內(nèi),抗生素的濫用已成了普遍現(xiàn)象,,國產(chǎn)血清中殘留很高,,對細胞培養(yǎng)極為不利,這是國產(chǎn)血清質(zhì)量差的根本原因,。
優(yōu)勢產(chǎn)品Noverse南美胎牛血清杭州現(xiàn)貨
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