THP-1適用胎牛血清NoverseNFBS-2500A

適合用于常規(guī)細胞原代細胞以及干細胞的培養(yǎng)
內(nèi)毒素含量極低 <3EU/ml(規(guī)定：特級胎牛血清<10 EU/ml)
極利于細胞的生長和傳代 ，適合各種細胞培養(yǎng)
七次無菌過濾,，zui后三次為0.1 µm無菌過濾處理
進行細菌,、真菌、支原體,、病毒及病毒抗體檢測,，符合動物協(xié)會要求

THP-1適用胎牛血清NoverseNFBS-2500A

細胞介紹

該細胞對乳汁珠和激活的紅細胞有吞噬作用，無表面和胞質(zhì)免疫球蛋白,。可以用佛波醇 TPA誘導(dǎo)單核細胞分化,。

細胞特性

1. 來源：急性單核細胞白血病，單核細胞
2. 形態(tài)：單核細胞，懸浮 

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1. 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,；Noverse優(yōu)等胎牛血清,，10%；0.05 mM β－巰基乙醇,；雙抗,，1%。
2. 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3. 凍存液：90%Noverse優(yōu)等胎牛血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

血清中包含絮狀沉淀,，它們是什么,，怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,，不會影響產(chǎn)品性質(zhì),。要除去沉淀，離心血清(400g,，1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾),。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解,。所以，使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃,，沉淀會自然消失,。

 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：

(1)解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生。

(2) 血清分裝凍存時,，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),，使溫度與成分均一。

(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,，因溫度改變太大,，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀,。

(4) 勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁,，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,，從而影響血清的品質(zhì)。

(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要,，可以無須做此步驟。

(6) 若必須做血清的熱滅活,，請遵守56℃,，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻,。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻,，都會造成沉淀物的增多,。

 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎?

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它,。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補體系統(tǒng),。激活的補體參與溶解細胞事件,，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺,，激活淋巴細胞和巨噬細胞,。在免疫學(xué) 研究，培養(yǎng)ES細胞,、平滑肌細胞時,，推薦使用熱滅活血清。

 有必要做熱滅活嗎?

實驗顯示,，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,，或*沒有任何作用,，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低,。而經(jīng)過熱處理的血清,，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,，像是“小黑點”,，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多,，使研究者誤認為是微生物 的分裂擴增,。

若非必須，可以不需要做熱處理這一步,。不但節(jié)省時間,，更確保血清的質(zhì)量!

細胞培養(yǎng) 中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理?

一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，首先,，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài),，黑點是否游動,。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖,，培養(yǎng)基就會迅速變黃,、變混濁。污染包括細菌污染,、支原體污染等,。

如果在鏡下觀察細胞，生長狀態(tài)良好,，與黑點出現(xiàn)前相比,，沒有任何變化，那么,，黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：

(1)細胞生長過老,，破碎的細胞殘骸;

(2)血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果;

(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,，不宜細胞生長;

(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì),、容器不合格?？蓱?yīng)用離心,、過濾的方法去除這些黑點;

(5)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點，可能是原代組織中的雜質(zhì),，多次傳代可以消除,。

 細胞培養(yǎng)中如何防止黑點生成?

(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。

(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴,。

(3) 培養(yǎng)基保持PH值7.0- 7.2,。

(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗,。

(5) 掌握細胞傳代的時機,，細胞切勿生長過老,。

仟諾生物，用誠信服務(wù)科研?。,。?/p>

適合用于常規(guī)細胞原代細胞的培養(yǎng)
內(nèi)毒素含量極低 <3EU/ml(規(guī)定：特級胎牛血清<10 EU/ml)
極利于細胞的生長和傳代 ,，適合各種細胞培養(yǎng)
七次無菌過濾,，zui后三次為0.1 µm無菌過濾處理
進行細菌、真菌,、支原體,、病毒及病毒抗體檢測，符合動物協(xié)會要求

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,，其組成成份雖大部分已知,，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別,、年齡,、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白,、多肽、脂肪,、碳水化合物,、生長因子、激素,、無機物等,，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的

牛血清是細胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,，常用于動物細胞的體外培養(yǎng),，具有極為重要的功能。

1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素,，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,，以及主要的低分子營養(yǎng)物。

2. 提供結(jié)合蛋白,，能識別維生素,、脂類、金屬和其他激素等,，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力,。

3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用,。

4.是細胞貼壁,、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源,。

5.起酸堿度緩沖液作用。

6.提供蛋白酶抑制劑,，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,，保護細胞不受傷害。

1,、如發(fā)現(xiàn)血清渾濁,，不透明，含許多沉淀物,，說明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性,，若棕紅色，說明血清中的血紅蛋白含量太高,，有溶血現(xiàn)象,。

2、總蛋白含量

胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,，數(shù)值偏高,，說明采血的牛齡偏大，不是胎牛,，數(shù)值偏低,，表明血清可能摻水了。

3,、血紅蛋白

標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,，顏色越紅，數(shù)值越高,，反之,，數(shù)值越低。

4,、pH

國產(chǎn)血清,，大多高于7.5，進口胎牛血清,，大多低于7.5,，具體原因未知，可能和牛齡有關(guān),，這也能用來初步鑒別血清的來源,。

5、微生物

包括細菌,、霉菌,、支原體、噬菌體,、各類病原性病毒等,。隨著國內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高,，細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制,，支原體經(jīng)過0.1um過濾,，大多也能清除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的,，主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入,，又無法過濾，很難*清除,，但對血清質(zhì)量影響不大,。病原性病毒，特別是BVDV,，在國產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,，這類微生物是影響國產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一，而進口胎牛血清中基本都控制的很好,。

6. 免疫球蛋白

國產(chǎn)血清的只是定性檢測,，結(jié)果也很不準(zhǔn)確，進口胎牛血清大多定量檢測,。免疫球蛋白的數(shù)值能*體現(xiàn)出采血的時的牛齡情況,，國產(chǎn)血清，基本都是新生牛的,，血清中容易產(chǎn)生IgM,，IgG的含量也偏高，進口胎牛血清,，不含IgM,，IgG的含量也較低,。

不管是國產(chǎn)還是進口血清,，都是不測抗生素的（無四環(huán)素胎牛血清除外）。國外,，抗生素的使用很嚴(yán)格,，用量也很少，每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以溯源的,，因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低;國內(nèi),，抗生素的濫用已成了普遍現(xiàn)象，國產(chǎn)血清中殘留很高,，對細胞培養(yǎng)極為不利,，這是國產(chǎn)血清質(zhì)量差的根本原因。