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細胞培養(yǎng)的基本原理與技術 現代生物技術一般認為包括基因工程技術,、細胞工程技術,、酶工程技術和發(fā)酵工程技術,而這些技術的發(fā)展幾乎都與細胞培養(yǎng)有密切關系,,特別是在醫(yī)藥領域的發(fā)展,,細胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價值。
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更新時間:2024/07/29 17:51:05瀏覽次數:779
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FTC-133甲狀腺癌細胞株
二,、使用方法
客戶收到細胞后,,請按照以下方法進行操作。
1.收到細胞,,請查看瓶子是否有破裂,,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,,如有請盡快和我們聯系,。
2.如包裝完好,取出25cm2培養(yǎng)瓶,,75%酒精消毒,拆下封口膜,在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)是否正常,,細胞的貼壁情況以及細胞密度,然后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置2-3h,,以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
3.細胞狀態(tài)穩(wěn)定后,棄除培養(yǎng)瓶中大部分液體,,只剩5-10ml左右培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)就可以了,,超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng),。
如為懸浮細胞,,吸出培養(yǎng)液,1000轉/分鐘離心3-5Min,吸出上清,,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶,。
4.細胞傳代
1)吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS 2-3ml清洗細胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1.5ml至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴1-2min左右;倒置顯微鏡下觀察,,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3)用吸管輕輕吹打混勻,按1:2適當的比例進行接種傳代,,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5ml,,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4)待細胞*貼壁后,,培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。
三、注意事項
1.在細胞培養(yǎng)過程中,,請注意保持無菌操作;
2.傳代培養(yǎng)過程中,,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài);
3.該細胞只可用于科研,。
剛收到細胞時,,胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天,利于細胞盡快恢復狀態(tài),,細胞穩(wěn)定后
再調回10%即可
收到細胞后如細胞狀態(tài)不佳,,或培養(yǎng)中遇到問題,煩請當天盡快聯系,,以便處理,。當天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要參考依據,請您務必重視,。
FTC-133甲狀腺癌細胞株
稀釋方法:
方法1. 實驗前,,將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋(或PBS稀釋),將稀釋后的抗體分裝5-10支(20ulx5支或10ulx10支),,放入-20℃保存,,用一支拿一支,避免反復凍溶,。
方法2. 實驗前,也可將凍干粉抗體用無菌蒸餾水稀釋50ul(或PBS稀釋50ul)成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存,,用多少吸多少。方法3. 預試驗可做幾個梯度1:100,、200,、400背景高還可做上去,選一個 的稀釋比例,,再正式做,效果,。工作液的稀釋-使用抗體稀釋液,。 公司產品經無數次市場驗證,若出現質量問題可無條件換貨或退貨,。
常用免疫組織化學方法的原理:
1. 免疫熒光細胞化學技術:將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會發(fā)出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量,。
2. 免疫酶細胞化學技術:是目前免疫組織化學研究中zui常用的技術.基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用,然后加入酶的底物,,生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒,,通過光鏡或電鏡,對細胞或組織內的相應抗原進行定位或定性研究,。
3. 免疫膠體金技術:就是用膠體金標記一抗,,二抗或其他的能特異性的結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針對組織或細胞內的抗原進行定性,,定位或定量研究.由于膠體金的電子密度高,多用于免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究,。
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