細胞代號：

細胞名稱：

EFM-19細胞;人乳腺癌細胞

組織來源：

對應(yīng)疾?。?/span>

生長特性：

細胞來源：

從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進

培養(yǎng)條件：

培養(yǎng)基：         DMEM         +10%FBS

氣相：空氣95%,，二氧化碳5%

溫度：37℃

培養(yǎng)：

一、貼壁細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行2-3小時的緩沖,，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口,，將其中的培養(yǎng)液去掉,，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代,；

2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%,，需要對其進行傳代，*次傳代比例為1:2,。

3傳代步驟：將0.25%含EDTA胰酶置于37°預(yù)熱,，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS,，輕晃洗滌后棄去,。往瓶中加1ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（*次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓,、輕拍瓶壁見細胞脫落為消化時間，記錄消化時間，以便于下次消化）,，消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化,。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落,，然后收集細胞懸液,，1200rpm離心3min，棄上清,，加入*培養(yǎng)基重懸細胞,，進行傳代。

二,、懸浮細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,，然后置于無菌操作臺，打開瓶口,，輕輕吹打后,，將其中的細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，然后1200rpm離心3min,，去上清,；

2.將離心好的細胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基,，然后將其置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液（離心后去舊液，加入新鮮培養(yǎng)基）,；

3.顯微鏡觀察細胞數(shù)目比較多時,，對其進行傳代，*次傳代比例為1:2（離心后平均分成兩瓶培養(yǎng)）,。

細胞總數(shù)：

1~3*10⁶

傳代周期：

2-3天

傳代比例：

1:2~1:4

換液頻率：

2-3天

凍存液：

90%FBS+10%DMSO