WM35人黑色素瘤細(xì)胞

造成實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞污染常見情況總結(jié)：
細(xì)胞培養(yǎng)中最常見污染的是細(xì)菌、真菌和支原體污染,。細(xì)胞一旦污染,，大多數(shù)較難處理,。那么，哪些情況我們不注意的話就會(huì)造成細(xì)胞污染呢,？我們根據(jù)常見細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)分析總結(jié)下,。
違規(guī)操作：1. 為節(jié)省時(shí)間，有人已經(jīng)用超凈臺(tái)四個(gè)多小時(shí),，不開紫外滅菌30min,酒精擦拭后直接開始試驗(yàn),。2. 器材或者溶液很久沒用，未檢測是否污染而直接使用,；離心管多次使用,，槍頭為了方便交叉使用。3. 超凈臺(tái)不點(diǎn)酒精燈,；點(diǎn)了酒精燈放在右上角,，而你在左下角做試驗(yàn)。4. 不帶手套,，徒手操作,。5. 細(xì)胞培養(yǎng)間配備槍式移液器、手術(shù)器械,、離心機(jī),、冰箱等儀器設(shè)備以及的實(shí)驗(yàn)服和拖鞋，未定期消毒,。物品被帶出細(xì)胞房使用。培養(yǎng)細(xì)胞過程中使用的所有實(shí)驗(yàn)用具,，如移液管,、一次性槍頭、一次性塑料離心管,、凍存管等未按要求滅菌使用（通常需121°C高壓滅菌20分鐘后37％烤干備用）,。
超凈臺(tái)和桌面，東西太多太亂：超凈臺(tái)不是儲(chǔ)物箱,，什么培養(yǎng)皿,、各種規(guī)格的板子、槍頭就不要堆在超凈臺(tái),！這樣就會(huì)有許多紫外線顧不到的衛(wèi)生死角,。細(xì)胞房其他的桌面，切忌東西堆積如山,，不要將酒精棉球,、標(biāo)簽紙、牛皮紙買來后全部堆在細(xì)胞房,！一不小心“飄”進(jìn)你的細(xì)胞培養(yǎng)板里,，細(xì)胞就會(huì)養(yǎng)的不好,，啥時(shí)候死了都不知道！
培養(yǎng)箱太久沒清潔：細(xì)胞污染了,，并非直接扔了培養(yǎng)皿就不管了,，首先你還得看看這個(gè)恒溫培養(yǎng)箱里其他培養(yǎng)皿或孔板里的細(xì)胞是否污染，如果有而且好幾個(gè)板子都有類似的污染塊,，那很可能是培養(yǎng)箱中的水或者空氣污染了,，得給培養(yǎng)箱做個(gè)大掃除，重新酒精消毒,，照紫外,；孵箱里的水，水沒了要記得加,，還得記得十天半個(gè)月的就用酒精擦擦托盤,。
細(xì)胞房人多口雜，難管理：在細(xì)胞房這種衛(wèi)生要求高,，人多了,，不確定因素多了，難以保證試驗(yàn)在無菌條件下操作,。出入試驗(yàn)室,，實(shí)驗(yàn)服當(dāng)風(fēng)衣穿，不扣紐扣,，不戴鞋套,，就容易造成細(xì)胞污染；超凈臺(tái)做實(shí)驗(yàn)時(shí),，喜歡說話聊著做試驗(yàn),，要是還不帶口罩，里面就有很多細(xì)菌等著去攻擊你的細(xì)胞呢,！" 

注意事項(xiàng)：
1. 收到細(xì)胞后先觀察細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們,。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基、血清比例,、所需細(xì)胞因子等,。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落,，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng),，隔天再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁,，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺(tái)盼藍(lán)染色測定細(xì)胞活力,，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常，請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng),；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力,，請拍下照片及時(shí)和我們，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次,。
4. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng),。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時(shí)可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,。
5. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和公司技術(shù)部溝通交流,。
6. 該細(xì)胞只能用于科研，不得用于臨床應(yīng)用

WM35人黑色素瘤細(xì)胞

細(xì)胞處理方法：

一,、貼壁細(xì)胞
1,、 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞 100X,200X 各一張）,。
2,、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開外包裝。
3,、嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,。
4,、37度平衡1-2小時(shí)。
5,、用移液管吸取培養(yǎng)基,，到50ml離心管中，剩下細(xì)胞密度達(dá)到80%至90%可以傳代,，如沒有達(dá)到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。
6、如果肉眼檢查上清有細(xì)胞,，對50ml上清進(jìn)行離心收集細(xì)胞,，如果細(xì)胞連片狀態(tài),，棄掉上清對收集的細(xì)胞進(jìn)行胰酶消化（1ml胰酶37度），接種培養(yǎng),。

二,、懸浮細(xì)胞
1、接收到細(xì)胞,，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞 100X,200X 各一張）,。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開外包裝,。
3,、嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,。
4,、細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒）。
5,、1000rpm,，5min 離心，用吸管小心吸出上清,，加入培養(yǎng)基,，重懸細(xì)胞。
6,、將重懸好的細(xì)胞轉(zhuǎn)入六孔板或者細(xì)胞培養(yǎng)瓶種,，加入新鮮培養(yǎng)基，置于 37℃,，5%CO2 培養(yǎng)（大部分細(xì)胞）,。