供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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更新時間:2024/07/29 11:37:11瀏覽次數(shù):796
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WiDr人大腸癌細(xì)胞
測定方法.
一,、細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測
根據(jù)凋亡細(xì)胞固有的形態(tài)特征,人們已經(jīng)設(shè)計了許多不同的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測方法.
1,、光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡
(1) 未染色細(xì)胞:凋亡細(xì)胞的體積變小、細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體.貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮,、變圓,、脫落.
(2) 染色細(xì)胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等.凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮,、邊緣化,核膜裂解,、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài).
2、熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來評判細(xì)胞凋亡的進展情況.
常用的DNA特異性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI.三種染料與 DNA的結(jié)合是非嵌入式的,主要結(jié)合在DNA的A-T堿基區(qū).紫外光激發(fā)時發(fā)射明亮的藍(lán)色熒光.
Hoechst是與DNA特異結(jié)合的活性染料,儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用時用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml.DAPI為半通透性,用于常規(guī)固定細(xì)胞的染色.儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用終濃度一般為0.5 ~1mg/ml. 結(jié)果評判:細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期:Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài),;aⅡ期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚,、邊緣化;bⅡ期的細(xì)胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體細(xì),。
WiDr人大腸癌細(xì)胞
細(xì)胞處理方法:
一,、貼壁細(xì)胞
1、 接收到細(xì)胞,,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,,并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞 100X,200X 各一張)。
2,、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝,。
3、嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范,,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,。
4,、37度平衡1-2小時。
5,、用移液管吸取培養(yǎng)基,,到50ml離心管中,剩下細(xì)胞密度達到80%至90%可以傳代,,如沒有達到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。
6、如果肉眼檢查上清有細(xì)胞,,對50ml上清進行離心收集細(xì)胞,,如果細(xì)胞連片狀態(tài),棄掉上清對收集的細(xì)胞進行胰酶消化(1ml胰酶37度),,接種培養(yǎng),。
二、懸浮細(xì)胞
1,、接收到細(xì)胞,,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,,并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞 100X,200X 各一張)。
2,、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝,。
3、嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范,,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,。
4、細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),。
5,、1000rpm,5min 離心,,用吸管小心吸出上清,,加入培養(yǎng)基,重懸細(xì)胞,。
6,、將重懸好的細(xì)胞轉(zhuǎn)入六孔板或者細(xì)胞培養(yǎng)瓶種,加入新鮮培養(yǎng)基,,置于 37℃,,5%CO2 培養(yǎng)(大部分細(xì)胞)。
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