scc-25人舌鱗癌細胞

培養(yǎng)條件    90%DMEM（高糖）+10%FBS+1%雙抗

溫度    37℃

空氣條件  5% CO2，,95% AIR

傳代方法1:2傳代,，2~3天換液

凍存條件90%FBS+10%DMSO

根據(jù)細胞生長的特點,，傳代方法有3種：

（1）懸浮生長細胞傳代

離心法傳代：離心（1000轉/分）去上清，沉淀物加新培養(yǎng)液后再混勻傳代,。

直接傳代法：懸浮細胞沉淀在瓶壁時,，將上清培養(yǎng)液去除1/2-2/3，然后用吸管直接吹打形成細胞懸液再傳代,。

（2）半懸浮生長細胞傳代（HeIa細胞）

此類細胞部分呈現(xiàn)貼壁生長現(xiàn)象,，但貼壁不牢，可用直接吹,。

打法使細胞從瓶壁脫落下來,，進行傳代。

（3）貼壁生長細胞傳代

采用酶消化法傳代,，常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液,。xy-6437R    ANKRD53錨蛋白重復域53抗體

scc-25人舌鱗癌細胞

貼壁細胞接收后的操作流程與注意事項
1.收到細胞當天盡快更換新鮮*培養(yǎng)基，第二天再進行消化處理
2.如果細胞收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),，請將懸浮的細胞即時離心,，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)觀察。同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基,，培養(yǎng)觀察
3.若出現(xiàn)生長不均：貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均,，成島狀生長,，可將細胞進行消化，重懸打散細胞,，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)

貼壁細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）
1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加適量0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間）
2.鏡下觀察消化情況,，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让?，加6~8ml *培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層,，盡量把細胞層吹落,，吹散
3.取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)?培養(yǎng)基,，把細胞懸液打勻,，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次）,，待細胞密度達到80%以后重復1項作或者凍存