RKO人結(jié)腸癌細胞(低分化)

縮寫:RKO

種屬:Human/人

來源:ATCC

縮寫:RKO

種屬:Human/人

來源:ATCC

背景資料:RKO是一個低分化的結(jié)腸癌細胞系,。RKO細胞含有野生型P53,，但缺乏人甲狀腺受體核受體(h-TRbeta1)。RKO細胞的P53蛋白的水平高于RKO-E6細胞,。RKO細胞系是RKO-E6和RKO-AS45-1的親本細胞系,。該細胞系在裸鼠中成瘤，且在軟瓊脂中形成集落,。

生長特性:貼壁生長

培養(yǎng)條件:89%EMEM+10%FBS+1%雙抗

規(guī)格:T25

細胞數(shù):1x10^6 cells

細胞活力:.95

細胞檢測:不含細菌,、真菌、支原體污染,。

傳代方法:1:2—1:4

凍存條件:90%FBS+10%DMSO

懸浮細胞接收后的操作流程與注意事項
1.如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,，漏液等情況請及時做好照片記錄并聯(lián)系實驗室 
2.擰松瓶蓋，細胞瓶豎立培養(yǎng)8h（或過夜）
3.待細胞沉底后吸除上層液體（含碎片殘渣,，請小心操作）,，然后吸取沉底的細胞層（2ML左右轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶，加入新鮮的*培養(yǎng)基（如細胞狀態(tài)較差可將血清濃度調(diào)高到15%）繼續(xù)培養(yǎng)
 
懸浮細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）
1.將培養(yǎng)瓶/皿中的細胞重懸混勻
2.吸取2/3或者一半混勻后的細胞懸液到新的培養(yǎng)瓶/皿
3.分別在原瓶/皿和新分瓶的培養(yǎng)瓶/皿加入等量或者2倍的新鮮培養(yǎng)基,，使細胞密度保持在5 X10(5) /ml左右
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況和細胞密度,，定期半量換液（每周2-3次），待細胞密度大于2 X 10(6) /ml以后重復1項操作或者凍存

RKO人結(jié)腸癌細胞(低分化)

貼壁細胞接收后的操作流程與注意事項
1.收到細胞當天盡快更換新鮮*培養(yǎng)基，第二天再進行消化處理
2.如果細胞收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),，請將懸浮的細胞即時離心,，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)觀察。同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基,，培養(yǎng)觀察
3.若出現(xiàn)生長不均：貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均,，成島狀生長，可將細胞進行消化,，重懸打散細胞,，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)

貼壁細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）
1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次,，加適量0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間）
2.鏡下觀察消化情況,，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让?，加6~8ml *培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層,，盡量把細胞層吹落,，吹散
3.取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)?培養(yǎng)基,，把細胞懸液打勻,，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次）,，待細胞密度達到80%以后重復1項作或者凍存