PH急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞

安全性：所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄,。收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細(xì)胞生長情況,。

（一）如果細(xì)胞未長滿,，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作,，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng),。

(二)如果細(xì)胞已長滿,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液,，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次,。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,，之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒后,，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出一半,，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明,，收到細(xì)胞后的*次傳代一般是一傳二,。

           注意事項(xiàng)：

1、觀察細(xì)胞在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行,，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度,。看細(xì)胞的形態(tài)請?jiān)?/span>10X或20X物鏡下,。

2,、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素,。

3,、有些細(xì)胞貼壁不牢,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi),。

4,、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染，請及時與我們,。

PH急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞

貼壁細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)
1.收到細(xì)胞當(dāng)天盡快更換新鮮*培養(yǎng)基,，第二天再進(jìn)行消化處理
2.如果細(xì)胞收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細(xì)胞即時離心,，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)觀察,。同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基，培養(yǎng)觀察
3.若出現(xiàn)生長不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均,，成島狀生長,，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重懸打散細(xì)胞,，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)

貼壁細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴(yán)格遵照無菌操作）
1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加適量0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時間）
2.鏡下觀察消化情況,，在細(xì)胞邊緣縮小,，貼壁松動時（不建議消化到細(xì)胞漂浮）去掉胰酶,，加6~8ml *培養(yǎng)基,，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落,，吹散
3.取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻,，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況,，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)作或者凍存