L-WRN小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞

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細(xì)胞培養(yǎng)三不要：
養(yǎng)科研細(xì)胞是生物醫(yī)學(xué)研究的基本功,。有三個(gè)小經(jīng)驗(yàn)可以和大家分享一下：
1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,，覺(jué)得這樣可以避免污染,。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎,？燒瓶口燒的,。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系,。瓶口在火焰上的時(shí)候，熾熱的空氣進(jìn)入瓶?jī)?nèi),。塞緊塞子放入冰箱后,，空氣變冷，壓力驟降,，培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳,，釋放出來(lái)。培養(yǎng)基中的碳酸少了,，當(dāng)然會(huì)變堿,。如果不燒瓶口的話，你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢,。（當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿,，因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高）
其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下,，你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼,。如果有細(xì)菌的話，這么晃兩下也燒不死多少,。要想燒死全部細(xì)菌,，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國(guó)內(nèi)從來(lái)就不燒瓶口,。來(lái)美國(guó)以后發(fā)現(xiàn)這里更*,，超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈。
2. 不要頻繁看細(xì)胞,。對(duì)于初學(xué)者而言,，養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看,。細(xì)胞越是養(yǎng)不好,，就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有任何好處,，細(xì)胞系特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后,，密度特別低的細(xì)胞。培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)因子是非常有限的,。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長(zhǎng)的因子在其周圍,，形成有利于生長(zhǎng)的局部環(huán)境。你跑去看細(xì)胞,，培養(yǎng)瓶這么一晃,，把因子都給晃散了。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇?xì)胞,，細(xì)胞老是長(zhǎng)不好,。老手細(xì)胞一扔好幾天不管，細(xì)胞瘋長(zhǎng),。
3. 不要怕消化,。在傳代的時(shí)候，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過(guò)度,，早早地終止消化,。細(xì)胞沒(méi)下來(lái)就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡,。在我看來(lái),，用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候,，37度消化過(guò)夜,，細(xì)胞也沒(méi)事。我一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化,。細(xì)胞輕輕一晃就能下來(lái)。還有,，動(dòng)作要輕柔,，盡量不要產(chǎn)生氣泡。應(yīng)力相當(dāng)大,，對(duì)細(xì)胞的傷害也是很大的,。