LOVO人結(jié)腸癌細胞

細胞縮寫：    LoVo細胞

細胞名稱：    LoVo(人結(jié)直腸腺癌細胞)

 詳細背景：    LoVo建自1971年,，從診斷為結(jié)腸腺癌的56歲男性白人的一個轉(zhuǎn)移到左鎖骨上區(qū)的腫瘤結(jié)節(jié)建系。 癌基因Ｃ-myc, K-ras, H-ras, N-ras, Myb, sis 和fos的表達呈陽性,。 癌基因N-myc的表達未做檢測,。 它在裸鼠中能成瘤。 與107細胞聯(lián)合皮下接種５只裸鼠21天后全部成瘤,。 表達腫瘤特異的核基質(zhì)蛋白蛋白CC-3和CC-4,。

        【產(chǎn)品來源】    細胞主要來源ATCC、DSMZ,、ECACC,、RIKEN、promocell,、ScienCell,、ECACC、JCRB,、KCLB,、Asterand、ICLC以及少數(shù)國內(nèi)外著名大學(xué)建系

     公司提供貼壁,、半貼壁,、懸浮、半懸浮,、貼壁與懸浮混合等細胞特性,，一般細胞培養(yǎng)PBS量是10%，如果出現(xiàn)細胞狀態(tài)不良情況,，可以提高PBS量到15%,，待細胞穩(wěn)定后，調(diào)回PBS量10%,，對于初次實驗者,，一般細胞培養(yǎng)，都需要加入雙抗防止細胞污染,，細胞匯合度達到90%,，我們開始寄送,，這樣可以保持細胞收到時,，良好的細胞活力。復(fù)蘇細胞注意事項：

1收到細胞后當(dāng)天換液,，全部更換成客戶自己的新鮮培養(yǎng)基,，放進培養(yǎng)箱，第二天再消化,。

2邊觀察邊消化根據(jù)細胞的形態(tài),，終止消化時間,，采取以半分鐘間隔吹打細胞邊緣，如可吹打下來,，即終止消化,。客戶摸索比較好的消化時間,。

3隨細胞有一份細胞操作說明書,，請客戶仔細查看。

4記得加1%雙抗,，降低被污染的概率,。另外盡早凍存留種，以備后用,。

5售后時間為一周,，僅限于細胞本身的質(zhì)量問題，而因乙方自己不當(dāng)操作（不規(guī)范操作,，消化過度,，不加雙抗導(dǎo)致的污染等）導(dǎo)致的細胞問題不在售后范疇。

6收到細胞后,，如細胞狀態(tài)不佳,，或培養(yǎng)中遇到問題，煩請當(dāng)天盡快聯(lián)系,，以便處理,。當(dāng)天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù)，請您務(wù)必重視,。

7剛收到細胞時,，胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天，利于細胞盡快恢復(fù)狀態(tài),，細胞狀態(tài)穩(wěn)定后,，再調(diào)回10%即可。

（其中1,2條針對于貼壁細胞,，懸浮細胞詳情請見細胞操作說明書）"    P4

        【產(chǎn)品包裝】    復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

細胞規(guī)格：    1*10(5)/ml——1*10（6）/ml

    安全水平：    1

    細胞種屬：    人

    組織來源：    直結(jié)腸腺癌,；轉(zhuǎn)移位置：左鎖骨上區(qū)

    細胞形態(tài)：    上皮細胞樣

    細胞特性：    貼壁

    細胞融合度：    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

    細胞檢測：    細胞不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌

        "細胞培養(yǎng)基的選擇和使用：

MEM：成分簡單,，貼壁細胞。

DMEM：分高糖型和低糖型,。

IDMEM：適合細胞密度低,，生長困難的細胞,。如雜交細胞的篩選，DNA轉(zhuǎn)染后轉(zhuǎn)化細胞的篩選培養(yǎng),。

RPM1640：應(yīng)用*泛的培養(yǎng)基之一,。懸浮細胞培養(yǎng)，主要針對淋巴細胞,，也適合其他細胞,。

199、109培養(yǎng)基：成分齊全,，培養(yǎng)效果較好,。

F10培養(yǎng)基：適合小鼠及人類二倍體細胞培養(yǎng)。

F12培養(yǎng)基：適合單細胞分離培養(yǎng)及無血清培養(yǎng),。

McCoy’s5A培養(yǎng)基：特別適合原代細胞及較難培養(yǎng)細胞的生長,。"    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

        【細胞檢測】    細胞不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌

        【培養(yǎng)條件】    詳見細胞說明書

        【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次

        【凍存條件】    詳見細胞說明書

        【主要文獻】    請具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

LOVO人結(jié)腸癌細胞

培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備基礎(chǔ)培養(yǎng)基( GIBCO,，，添加NaHCO3 1.5g/L,，丙酮酸鈉 0.11g/L),；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。

2） 傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存。

購買細胞注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系,。

2. 仔細閱讀細胞說明書,，細胞了解細胞相關(guān)信息如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細胞因子等。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜，隔天再取出觀察,。此時多數(shù)細胞均會貼壁,，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常,，請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng),；如果染色結(jié)果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們聯(lián)系,，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次,。

4. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通交流

細胞培養(yǎng)三不要：

養(yǎng)科研細胞是生物醫(yī)學(xué)研究的基本功,。有三個小經(jīng)驗可以和大家分享一下：

1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,，覺得這樣可以避免污染,。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎,？燒瓶口燒的,。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候,，熾熱的空氣進入瓶內(nèi),。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷,，壓力驟降,，培養(yǎng)基中的碳酸就會轉(zhuǎn)化成二氧化碳，釋放出來,。培養(yǎng)基中的碳酸少了,，當(dāng)然會變堿。如果不燒瓶口的話,，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢,。（當(dāng)然多多少少還是會有一點越用越堿，因為室溫還是比冰箱內(nèi)的溫度高）

其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰,。不妨試一下把手指在火上晃幾下,，你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼。如果有細菌的話,，這么晃兩下也燒不死多少,。要想燒死全部細菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口,。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*,，超凈臺內(nèi)根本就不點酒精燈。

2. 不要頻繁看細胞,。對于初學(xué)者而言,，養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣,，有空就要去看看,。細胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看,。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處,，細胞特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞,。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的,。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境,。你跑去看細胞,，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了,。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇毎毎鲜情L不好,。老手細胞一扔好幾天不管,，細胞瘋長。

3. 不要怕消化,。在傳代的時候,，初學(xué)者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化,。細胞沒下來就使勁吹燈,，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,，用力吹打?qū)毎膿p傷比消化更大,。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r候，37度消化過夜,，細胞也沒事,。我一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來,。還有,，動作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡。

應(yīng)力相當(dāng)大,，對細胞的傷害也是很大的,。"    詳見細胞說明書

    傳代方法：    建議1:2-1:3 兩天換液一次

    凍存條件：    詳見細胞說明書

    主要文獻：    請具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

細胞培養(yǎng)三不要：

養(yǎng)科研細胞是生物醫(yī)學(xué)研究的基本功。有三個小經(jīng)驗可以和大家分享一下：
1. 不要燒瓶口,。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑,？知道為什么嗎,？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系,。瓶口在火焰上的時候,，熾熱的空氣進入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后,，空氣變冷,，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會轉(zhuǎn)化成二氧化碳,，釋放出來,。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會變堿,。如果不燒瓶口的話,，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。（當(dāng)然多多少少還是會有一點越用越堿,，因為室溫還是比冰箱內(nèi)的溫度高）
其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰,。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼,。如果有細菌的話,，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌,，除非把瓶口和塞子燒紅,。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*,，超凈臺內(nèi)根本就不點酒精燈,。
2. 不要頻繁看細胞。對于初學(xué)者而言,，養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣,，有空就要去看看。細胞越是養(yǎng)不好,，就越是經(jīng)常去看,。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處,，細胞系特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞,。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的,。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境,。你跑去看細胞,，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了,。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇毎毎鲜情L不好,。老手細胞一扔好幾天不管,，細胞瘋長,。
3. 不要怕消化,。在傳代的時候，初學(xué)者往往生怕細胞消化過度,，早早地終止消化,。細胞沒下來就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡,。在我看來,，用力吹打?qū)毎膿p傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r候,，37度消化過夜,，細胞也沒事。我一般是等細胞*變圓后才中止消化,。細胞輕輕一晃就能下來,。還有，動作要輕柔,，盡量不要產(chǎn)生氣泡,。應(yīng)力相當(dāng)大，對細胞的傷害也是很大的,。