kyse410人食管癌細(xì)胞

  含量：>1x106 個(gè)/mL

 污染：支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

培養(yǎng)基：90%F-12+10%FBS

生長特性：貼壁生長

運(yùn)輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,，可在1000RPM,，常溫條件下，離心5min后,，于潔凈操作臺(tái)棄去上清,，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。               

培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備基礎(chǔ)培養(yǎng)基( GIBCO，,，添加NaHCO3 1.5g/L,，丙酮酸鈉 0.11g/L)；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

kyse410人食管癌細(xì)胞

   "購買細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,，細(xì)胞了解細(xì)胞相關(guān)信息如細(xì)胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基、血清比例,、所需細(xì)胞因子等,。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落,，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜，隔天再取出觀察,。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁,，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常,，請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng),；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力，請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們聯(lián)系,，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次,。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通交流

細(xì)胞培養(yǎng)三不要：

養(yǎng)科研細(xì)胞是生物醫(yī)學(xué)研究的基本功,。有三個(gè)小經(jīng)驗(yàn)可以和大家分享一下：

1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,，覺得這樣可以避免污染,。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎,？燒瓶口燒的,。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候,，熾熱的空氣進(jìn)入瓶內(nèi),。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷,，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳,，釋放出來,。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會(huì)變堿,。如果不燒瓶口的話,，你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢。（當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿,，因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高）

其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰,。不妨試一下把手指在火上晃幾下,，你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼。如果有細(xì)菌的話,，這么晃兩下也燒不死多少,。要想燒死全部細(xì)菌，除非把瓶口和塞子燒紅,。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口,。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*，超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈,。

2. 不要頻繁看細(xì)胞,。對(duì)于初學(xué)者而言，養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣,，有空就要去看看,。細(xì)胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看,。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長沒有任何好處,，細(xì)胞特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細(xì)胞,。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的,。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境,。你跑去看細(xì)胞,，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了,。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇?xì)胞，細(xì)胞老是長不好,。老手細(xì)胞一扔好幾天不管,，細(xì)胞瘋長。

3. 不要怕消化,。在傳代的時(shí)候,，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過度，早早地終止消化,。細(xì)胞沒下來就使勁吹燈,，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,，用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大,。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候，37度消化過夜,，細(xì)胞也沒事,。我一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化,。細(xì)胞輕輕一晃就能下來。還有,，動(dòng)作要輕柔,，盡量不要產(chǎn)生氣泡。

應(yīng)力相當(dāng)大,，對(duì)細(xì)胞的傷害也是很大的,。"    詳見細(xì)胞說明書

    傳代方法：    建議1:2-1:3 兩天換液一次

    凍存條件：    詳見細(xì)胞說明書

    主要文獻(xiàn)：    請(qǐng)具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

細(xì)胞培養(yǎng)三不要：

養(yǎng)科研細(xì)胞是生物醫(yī)學(xué)研究的基本功。有三個(gè)小經(jīng)驗(yàn)可以和大家分享一下：
1. 不要燒瓶口,。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑,？知道為什么嗎,？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系,。瓶口在火焰上的時(shí)候,，熾熱的空氣進(jìn)入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后,，空氣變冷,，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳,，釋放出來,。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會(huì)變堿,。如果不燒瓶口的話,，你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢。（當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿,，因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高）
其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰,。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼,。如果有細(xì)菌的話,，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細(xì)菌,，除非把瓶口和塞子燒紅,。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*,，超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈,。
2. 不要頻繁看細(xì)胞,。對(duì)于初學(xué)者而言,，養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣,，有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好,，就越是經(jīng)常去看,。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長沒有任何好處，細(xì)胞系特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后,，密度特別低的細(xì)胞,。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長的因子在其周圍,，形成有利于生長的局部環(huán)境,。你跑去看細(xì)胞，培養(yǎng)瓶這么一晃,，把因子都給晃散了,。經(jīng)常可以看到新手一天到晚都在看細(xì)胞,，細(xì)胞老是長不好,。老手細(xì)胞一扔好幾天不管，細(xì)胞瘋長,。
3. 不要怕消化,。在傳代的時(shí)候，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過度,，早早地終止消化,。細(xì)胞沒下來就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡,。在我看來,，用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候,，37度消化過夜,，細(xì)胞也沒事。我一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化,。細(xì)胞輕輕一晃就能下來,。還有，動(dòng)作要輕柔,，盡量不要產(chǎn)生氣泡,。應(yīng)力相當(dāng)大，對(duì)細(xì)胞的傷害也是很大的,。