IMR-90人胚肺成纖維細胞

【產(chǎn)品產(chǎn)地】ATCC
【細胞形式】凍存及復蘇
【質(zhì)量控制】本細胞經(jīng)過了檢測，不含有細菌,、真菌,、病毒（HIV、HBV,、HCV）,、支原體。
【培養(yǎng)條件】37℃,，5% CO2,，PH值7.2~7.4，無菌恒溫培養(yǎng),。
【研究范圍】本產(chǎn)品只提供科研使用,，不可應用于治療等其他方面。
活力檢測操作步驟：
1. 配制4%臺盼藍母液：稱取4g臺盼藍,，加少量蒸餾水研磨,，加雙蒸水至100mL，用濾紙過濾,，4℃保存,。使用時用PBS稀釋至0.4%。
2. 胰酶消化貼壁細胞,，制備單細胞懸液,，并作適當稀釋（106 cells/mL）。
3. 取少量細胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9:1混合,，輕輕吹打混勻,，染色2~3min,。
4. 顯微鏡下觀察,，死細胞著淺藍色并膨大，無光澤,；活細胞保持正常形態(tài),，無色透明有光澤。若需計算活細胞率則將染色的細胞懸液滴入細胞計數(shù)板計數(shù),。
活細胞率（%）= 活細胞總數(shù)/（活細胞總數(shù)+死細胞總數(shù)）×100%
注意事項：臺盼藍染細胞時,，時間不宜過長。否則，部分活細胞也會著色,，會干擾計數(shù)的準確性,。
注意：初學者易犯錯誤： 1．水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。 2．水浴鍋內(nèi)凍存管太多,，導致傳熱不佳,，使融化時間延長。 3．離心前忘記平衡,，導致離心機損壞和細胞丟失,。 4．一次復蘇細胞過多，忘記更換吸頭和吸管,，導致細胞交叉污染,。

IMR-90人胚肺成纖維細胞

傳代操作步驟：

一、貼壁細胞傳代

1.提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱,，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)。

2.吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,，加少量PBS潤洗細胞,。

3.加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞,，37℃孵育,，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大,、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶,，終止胰酶作用,。

4.胞用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液,?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡,。

5.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng),，隔天觀察貼壁生長情況,。

二、懸浮細胞傳代

1.將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),，1000rpm離心5min,。

2.棄去上清,，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀,，制成細胞懸液,。

3.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),。

培養(yǎng)的過程中，經(jīng)常見到黑色的顆?；蛐『邳c,，這種情況是怎么引起的呢？該怎么避免呢,？原因：

黑點,，大概有細胞本身帶的，環(huán)境有的,，還有人身上帶進細胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基

1,、如果小黑點有增殖趨勢，那么就有可能是污染了,，需要處理,；

2、如果小黑點沒有增殖趨勢,，且不影響細胞生長,，也不影響實驗的話，則可能

 a,、是“黑膠蟲”,，黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭議,。有人認為是從血清中來的一種原蟲,，也有人認為是細菌，或是真菌,，也有人認為是血清中的蛋白的結晶,。“黑膠蟲”可寄生于動物細胞，也可以生存于培養(yǎng)基中,，依靠細胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生,，并隨細胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細胞競爭性生長,，開始時對細胞并沒有什么影響,，但當黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時候,， 細胞生長就會受到影響直至死亡,，嚴重影響了科研活動的開展和進行。以前（這個至少是10年以前），很多實驗室在養(yǎng)細胞時用國產(chǎn)血清,，那時的血清可能質(zhì)量不過關,，有所謂的“黑膠蟲”，但是也沒有明確的鑒定,。但是現(xiàn)在的血清,，即使國產(chǎn)的，產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見了,。

 b,、是細胞碎片，或血清里德沉淀析出,，在做布朗運動,。

 c、是核糖體,，也可能是雜質(zhì)ZYC3153    人腎母細胞瘤細胞    SK-NEP-1    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3154    人腎透明細胞腺癌細胞    786-O [786-0]    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3155    人腎透明細胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細胞    Caki-1    形態(tài)：貼壁，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3156    人腎細胞腺癌細胞    ACHN    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3157    人子宮內(nèi)膜腺癌細胞    HEC-1-A    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3158    人絨毛膜癌細胞    JEG-3    形態(tài)：貼壁，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3159    人臍靜脈細胞融合細胞    EA.ZY926    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3160    人膀胱癌細胞    5637    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3161    人輸尿管上皮永生化細胞    SV-HUC-1    形態(tài)：貼壁，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3162    人滑膜肉瘤細胞    SW 982 [SW-982, SW982]    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3163    人膀胱移行細胞癌細胞    T24    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3164    人T淋巴細胞白血病細胞    HuT 78    形態(tài)：貼壁，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3165    人結直腸腺癌細胞    COLO 320DM     形態(tài)：貼壁,，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS