HL-1小鼠心肌細胞

生長特性：    □ 貼壁   □ 懸浮   □懸浮+貼壁

細胞生長條件：

二．使用方法

按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶,，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜，放入37℃,，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài),，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2,、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次,；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，再輕輕吹打細胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min,；

3）棄上清,，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代,，最后放入37℃,，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞*貼壁后,，觀察培養(yǎng)結(jié)果,，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3,、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次,；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，輕輕吹打細胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min,；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞,，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,，然后將其移入-80℃過夜,，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存,。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4,、細胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）,，快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁,；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min,；

3）棄上清,，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶,，于37℃,，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天,，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。

HL-1小鼠心肌細胞
貼壁細胞接收后的操作流程與注意事項
1.收到細胞當天盡快更換新鮮*培養(yǎng)基,，第二天再進行消化處理
2.如果細胞收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)觀察,。同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基,，培養(yǎng)觀察
3.若出現(xiàn)生長不均：貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長,，可將細胞進行消化,，重懸打散細胞，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)

貼壁細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）
1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，PBS緩沖液潤洗細胞兩次,，加適量0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間）
2.鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小,，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让福?~8ml *培養(yǎng)基,，輕輕吹打細胞層,，盡量把細胞層吹落，吹散
3.取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,，添加適當?shù)?培養(yǎng)基,，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況,，定期換液（每周2-3次）,，待細胞密度達到80%以后重復(fù)1項作或者凍存