Hep3B人肝癌細胞

描述：

   SMMC-7721人肝癌細胞取自人肝癌組織,，采用靜置和旋轉(zhuǎn)管法培養(yǎng)11天細胞開始生長，首次傳代23天,。SMMC-7721細胞AFP陽性,；用Northern Blot方法，未能檢測到SMMC-7721細胞中1.3kb LFIRE-1/HFREP-1 mRNA的表達,，免疫缺陷小鼠體內(nèi)可成瘤,。

細胞提取于人淋巴結(jié)組織，原代凍存,。每管含有細胞數(shù)>5×10 5cells/ml,，此細胞通過vWF/Factor VIII 和CD31 (P-CAM)免疫熒光染色驗證，經(jīng)測試不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌,。細胞可以達到15倍增,。

配套培養(yǎng)基: 內(nèi)細胞培養(yǎng)基：(ECM, Cat. No. 1001)

產(chǎn)品使用說明：僅供科研研究使用

推薦培養(yǎng)基：平滑肌細胞培養(yǎng)基

產(chǎn)品使用說明:本產(chǎn)品僅用于科研。

Hep3B人肝癌細胞

培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備基礎(chǔ)培養(yǎng)基( GIBCO,，,，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸鈉 0.11g/L),；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存,。

細胞注意事項：

1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系,。

2.先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時（4h左右）,，穩(wěn)定細胞狀態(tài),，切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜,。

3.靜置后鏡檢，拍照,，記錄細胞狀態(tài),。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。

4.  懸浮細胞：將細胞瓶內(nèi)液體都轉(zhuǎn)移至無菌離心管內(nèi),，1000 轉(zhuǎn)/分鐘離心5min,，培養(yǎng)基上清可備用，管底細胞沉淀用培養(yǎng)基重懸,。鏡檢時若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞瓶內(nèi)培養(yǎng)；若密度未超過80%,，細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，待達到80%時再正常傳代。備注：聚團生長慢,，有密度依賴,，必須使用T25培養(yǎng)瓶豎立培養(yǎng)，3天一次半量換液一次,，1-2周傳代一次,。

貼壁細胞：若細胞密度超過80%，可正常傳代,；若未超過80%,，收集細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代,，瓶蓋可稍微擰松。備注：細胞貼壁慢,，傳代后細胞放2天不動,。

5.細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補加2%血清,。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,，一半用客戶自備的培養(yǎng)基,，使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,，以免因不適應(yīng)而造成生長狀態(tài)不佳,。