HC-OA成人軟骨細(xì)胞-骨性關(guān)節(jié)炎

Cat.#402OA-05a
人軟骨細(xì)胞-骨性關(guān)節(jié)炎，成人,，Human Chondrocyte-Osteoarthritis(HC-OA), adult,。HC-OA來源于骨性關(guān)節(jié)炎患者的關(guān)節(jié)軟骨,，第1代時(shí)凍存于含有 10% FBS 和 10% DMSO 的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，細(xì)胞數(shù)量>5×10⁵cells/ml ,，可以達(dá)到10倍增。每個(gè)批次經(jīng)檢測均不含有HIV,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌和真菌,。
推薦培養(yǎng)基：411-500、411K-500

運(yùn)輸條件： 干冰運(yùn)輸,、 液氮保存

推薦產(chǎn)品：

HC-OA成人軟骨細(xì)胞-骨性關(guān)節(jié)炎

 "細(xì)胞培養(yǎng)三不要：

養(yǎng)科研細(xì)胞是生物醫(yī)學(xué)研究的基本功。有三個(gè)小經(jīng)驗(yàn)可以和大家分享一下：

1. 不要燒瓶口,。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑,？知道為什么嗎,？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系,。瓶口在火焰上的時(shí)候,，熾熱的空氣進(jìn)入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后,，空氣變冷,，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳,，釋放出來,。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會(huì)變堿,。如果不燒瓶口的話,，你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢。細(xì)胞（當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿,，因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高）

其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰,。不妨試一下把手指在火上晃幾下,，你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼。如果有細(xì)菌的話,，這么晃兩下也燒不死多少,。要想燒死全部細(xì)菌，除非把瓶口和塞子燒紅,。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口,。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*，超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈,。

2. 不要頻繁看細(xì)胞,。對(duì)于初學(xué)者而言，養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣,，有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好,，就越是經(jīng)常去看,。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長沒有任何好處,，特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細(xì)胞,。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長的因子在其周圍,，形成有利于生長的局部環(huán)境,。你跑去看細(xì)胞,，培養(yǎng)瓶這么一晃,，把因子都給晃散了,。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇?xì)胞，細(xì)胞老是長不好,。老手細(xì)胞一扔好幾天不管，細(xì)胞瘋長,。

3. 不要怕消化,。在傳代的時(shí)候,，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過度,，早早地終止消化,。細(xì)胞沒下來就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡,。在我看來,，用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候,，37度消化過夜,，細(xì)胞也沒事。我一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化,。細(xì)胞輕輕一晃就能下來,。還有，動(dòng)作要輕柔,，盡量不要產(chǎn)生氣泡,。

細(xì)胞培養(yǎng)方面注意的幾點(diǎn)：

無菌意識(shí)要強(qiáng)：實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，超凈臺(tái)以紫外燈照射30分鐘滅菌,，以70 % ethanol擦拭無菌操作抬面,，并開啟超凈工作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作,。
每次操作只處理一株細(xì)胞株,，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),，以70 % ethanol擦拭無菌操作抬面。
無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,，必要物品,，例如支架、吸管等公用物品可以暫時(shí)放置，其它個(gè)人實(shí)驗(yàn)用品用完應(yīng)立即拿出,。實(shí)驗(yàn)用品以70%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺(tái)內(nèi),。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作,。
小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品,，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,，亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn),。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身,，傾斜約 45°角取用,，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細(xì)胞可能培養(yǎng)基不同,，甚至不同的文獻(xiàn)可能對(duì)相同的細(xì)胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的,。如我當(dāng)時(shí)培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，有文獻(xiàn)就選用neurobase培養(yǎng)基,，而我的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕亲隹寡趸脱趸矫娴?，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時(shí),，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基,。
瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),，使溫度與成分均一,，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解凍,，因溫度改變太大,，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
熱滅活是指56℃,，30分鐘加熱已*解凍之血清,。水浴鍋升到56℃后，將血清放入,，待溫度升高到56℃后計(jì)時(shí),，一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份去活化,。除非必須,，一般不要作此熱處理，因?yàn)闀?huì)造成沉淀物之顯著增多,，且會(huì)影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清（包括不同批次）對(duì)細(xì)胞的影響