HCC1954人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

含量：>1x106 個(gè)/mL

 污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10%FBS

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

運(yùn)輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞,。收到細(xì)胞后，可在1000RPM,，常溫條件下,，離心5min后,，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。               

HCC1954人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備基礎(chǔ)培養(yǎng)基( GIBCO，,，添加NaHCO3 1.5g/L,，丙酮酸鈉 0.11g/L)；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1.收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,。

2.先不開瓶蓋,，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(shí)（4h左右），穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜,。

3.靜置后鏡檢,，拍照,，記錄細(xì)胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長(zhǎng)情況,。

4.  懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)液體都轉(zhuǎn)移至無菌離心管內(nèi),，1000 轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，培養(yǎng)基上清可備用,，管底細(xì)胞沉淀用培養(yǎng)基重懸,。鏡檢時(shí)若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),；若密度未超過80%,，細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，待達(dá)到80%時(shí)再正常傳代,。備注：聚團(tuán)生長(zhǎng)慢,，有密度依賴,，必須使用T25培養(yǎng)瓶豎立培養(yǎng)，3天一次半量換液一次,，1-2周傳代一次,。

貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞密度超過80%，可正常傳代,；若未超過80%,，收集細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代,，瓶蓋可稍微擰松,。備注：細(xì)胞貼壁慢，傳代后細(xì)胞放2天不動(dòng),。

5.細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗,，可收集后4℃保存?zhèn)溆茫裳a(bǔ)加2%血清,。剛開始傳代時(shí)建議一半用細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基,，一半用客戶自備的培養(yǎng)基，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,，以免因不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)狀態(tài)不佳,。