CCC-ESF-1人皮膚成纖維細(xì)胞

當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時(shí)，可以?xún)龃婕?xì)胞,，在超凈臺(tái)中將要凍存的細(xì)胞移入離心管,，1000rpm離心5min，棄上清,，用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細(xì)胞,，并調(diào)整細(xì)胞密度為4-6×106/ml，將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管),。

含量：>1x10⁶ 個(gè)/mL,，  規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

培養(yǎng)基：DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存,。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

CCC-ESF-1人皮膚成纖維細(xì)胞

傳代操作步驟：

一、貼壁細(xì)胞傳代

1.提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)。

2.吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,。

3.加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育,，每隔2~3min顯微鏡下觀察,，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,，加入新鮮培養(yǎng)基,，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用,。

4.細(xì)胞用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡。

5.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況,。

二,、懸浮細(xì)胞傳代

1.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min,。

2.棄去上清,，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀,，制成細(xì)胞懸液,。

3.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),。

培養(yǎng)的過(guò)程中，經(jīng)常見(jiàn)到黑色的顆?；蛐『邳c(diǎn),，這種情況是怎么引起的呢？該怎么避免呢,？原因：

黑點(diǎn),，大概有細(xì)胞本身帶的，環(huán)境有的,，還有人身上帶進(jìn)細(xì)胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基

1,、如果小黑點(diǎn)有增殖趨勢(shì)，那么就有可能是污染了,，需要處理,；

2,、如果小黑點(diǎn)沒(méi)有增殖趨勢(shì)，且不影響細(xì)胞生長(zhǎng),，也不影響實(shí)驗(yàn)的話,，則可能

 a、是“黑膠蟲(chóng)”,，黑膠蟲(chóng)究竟是一種生物還是非生物,，本身就存在爭(zhēng)議。有人認(rèn)為是從血清中來(lái)的一種原蟲(chóng),，也有人認(rèn)為是細(xì)菌,，或是真菌，也有人認(rèn)為是血清中的蛋白的結(jié)晶,。“黑膠蟲(chóng)”可寄生于動(dòng)物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中,，依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)為生,，并隨細(xì)胞傳代而傳代。“黑膠蟲(chóng)”與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng),，開(kāi)始時(shí)對(duì)細(xì)胞并沒(méi)有什么影響,，但當(dāng)黑膠蟲(chóng)的數(shù)量多到一定程度的時(shí)候， 細(xì)胞生長(zhǎng)就會(huì)受到影響直至死亡,，嚴(yán)重影響了科研活動(dòng)的開(kāi)展和進(jìn)行,。以前（這個(gè)至少是10年以前），很多實(shí)驗(yàn)室在養(yǎng)細(xì)胞時(shí)用國(guó)產(chǎn)血清,，那時(shí)的血清可能質(zhì)量不過(guò)關(guān),，有所謂的“黑膠蟲(chóng)”，但是也沒(méi)有明確的鑒定,。但是現(xiàn)在的血清,，即使國(guó)產(chǎn)的，產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見(jiàn)了,。

 b,、是細(xì)胞碎片，或血清里德沉淀析出,，在做布朗運(yùn)動(dòng),。

 c、是核糖體,，也可能是雜質(zhì)ZYC3664    小鼠黑質(zhì)神經(jīng)元    MN-sn    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3665    小鼠紋狀體神經(jīng)元    MN-s    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有,；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3666    小鼠腹脊髓神經(jīng)元    MN-vsc    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3667    小鼠背脊髓神經(jīng)元    MN-dsc    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有,；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3668    小鼠脊髓神經(jīng)元    MN-sc    形態(tài)：貼壁，懸浮均有,；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3669    小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞    MOPC    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3670    小鼠雪旺細(xì)胞    MSC    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有,；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3671    小鼠神經(jīng)束膜細(xì)胞    MPNF    形態(tài)：貼壁，懸浮均有,；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3672    小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞    MA    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3673    小鼠小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞    MA-c    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有,；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3674    小鼠海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞    MA-h    形態(tài)：貼壁，懸浮均有,；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3675    小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞    MA-sc    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS