CALU-3人肺腺癌細(xì)胞

英文名稱：Calu-3 human lung adenocarcinoma cell line
規(guī)格：5×106cells/瓶×2
貨號：BJ01-054
作用：科研使用不可應(yīng)用于治療等其他方面

保存條件：4℃保存一年;-20℃長期保存
儲存：液氮,。
運(yùn)輸：干冰(第二代培養(yǎng)末期液氮凍存),。
每凍存管細(xì)胞數(shù)：>5×105 cells/1ml。
在使用細(xì)胞前首先觀察瓶身是否有縫隙,、裂痕,，在用新潔爾滅消毒瓶口及瓶身，打開瓶口(可能會有液體溢出,，注意不要碰到液體),，再次用新潔爾滅消毒瓶口，酒精燈烤瓶口消毒,。顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長狀況,，有無細(xì)胞漂浮，將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至50ml離心管或廣口瓶中(若細(xì)胞漂浮嚴(yán)重,，離心培養(yǎng)基,，1000g*5分鐘,，將離心后的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至另一個大離心管中,，留一點(diǎn)吹打細(xì)胞沉淀成懸液,，回收細(xì)胞至原培養(yǎng)瓶)，若漂浮不嚴(yán)重,，亦離心一下,。在原培養(yǎng)瓶中留一部分原裝培養(yǎng)液，再補(bǔ)加自己新配的培養(yǎng)基至適當(dāng)容積,，例如4ml,，讓細(xì)胞適應(yīng)一下環(huán)境。 當(dāng)細(xì)胞長到70-80%,，凍存大部分,，小部分傳代。

CALU-3人肺腺癌細(xì)胞

1)培養(yǎng)瓶有破裂,，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會污染,，所以我們會及時安排幫老師解決；2)細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封,，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察,，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以離心去掉,，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,，細(xì)胞生長至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代,；如細(xì)胞還是不貼壁,，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),，中間注意觀察,，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決,；3)對于生長緩慢的貼壁細(xì)胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度,，或隔日換液的方法來保證細(xì)胞的狀態(tài)和生長速度；4)對于生長不均的貼壁細(xì)胞：在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)細(xì)胞分布明顯不均時(即某一區(qū)域細(xì)胞已重疊生長,，而旁邊則為一塊空白),，此時可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重新打散,，貼壁,，加入新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),。
細(xì)胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次,。
細(xì)胞傳代注意事項：①傳代培養(yǎng)時注意無菌操作并防止細(xì)胞間的交叉污染,。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次進(jìn)行一種細(xì)胞的操作,。每種細(xì)胞使用一套器材,；②每天觀察細(xì)胞形態(tài)，掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn)：健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿,，折光性好,，生長致密時即可傳代；③如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染跡象,，應(yīng)立即采取措施,，一般應(yīng)棄置污染的細(xì)胞，如果必須挽救,，可加含有抗生素的BBS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗,，隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗生素，并經(jīng)常更換培養(yǎng)基,。傳代細(xì)胞的建系和維持：細(xì)胞系的維持通過換液傳代再換液,、再傳代和細(xì)胞種子凍存來實現(xiàn)。對每一個細(xì)胞系來說都有其自身的特點(diǎn),，要做好建系的維持必須記錄好細(xì)胞檔案,換液傳代和做好細(xì)胞系的管理工作,。培養(yǎng)細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇：細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中,，儲存時間幾乎是無限的,。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)
細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書
細(xì)胞凍存的步驟：1)選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,，在凍存前一天換液,。將多個培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化,。適時去掉胰蛋白酶,，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,，使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液,。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,，10分鐘),；2)去上清液，加入含20%小牛血清的*培養(yǎng)基,，于4℃預(yù)冷15分鐘后,，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，細(xì)胞濃度為5×106～1×107/mL之間,。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢,？答案是不一定的，具體要看培養(yǎng)的細(xì)胞類型來選擇,；3)將分裝上述細(xì)胞懸液于2ml凍存管中,，每管0.25ml,。凍存管要將蓋子蓋緊,，并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期，同時作好登記(日期,、細(xì)胞種類及代次,、凍存支數(shù))；4)將裝好細(xì)胞的凍存管放到凍存盒中,，-80℃冰箱過夜,。；如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜,，放入液氮罐);或者可以在4℃,，2h;然后轉(zhuǎn)到-20℃，2h;-80℃,，2h;放入液氮罐,；5)細(xì)胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見,，凍存半年后,，取出一只凍存管細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察生長情況,，然后再繼續(xù)凍存,。