BRL大鼠肝細(xì)胞

產(chǎn)品名稱：大鼠肝細(xì)胞 BRL
規(guī)格：70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細(xì)胞一瓶
特點(diǎn)：細(xì)胞代數(shù)為4-5代左右
包裝：內(nèi)層無菌自封袋,；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋,；說明書
細(xì)胞來源：ATCC,、sciencell、ICLC
貨期：1-2周
運(yùn)輸方式：快遞運(yùn)輸
售后：收到細(xì)胞后7天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題（如污染,，死亡,，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)，應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報(bào)告并及時(shí)傳真或E-mail致銷售人員,，我們將盡快為您解決,。

BRL大鼠肝細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)常見問題分析

細(xì)胞培養(yǎng)
1、冷凍管應(yīng)如何解凍,？
取出冷凍管后,， 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍， 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化,， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,， 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),， 必須注意安全,， 預(yù)防冷凍管之爆裂。
2,、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí),， 是否應(yīng)馬上去除DMSO？
除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細(xì)胞外,， 絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞）,， 在解凍之后， 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中,， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,， 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附之問題。
3,、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,？
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,， 細(xì)胞大都無法立即適應(yīng)， 造成細(xì)胞無法存活,。
4,、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？
不能,。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源,， 所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無法存活。
5,、何謂FBS, FCS, CS, HS ?
FBS （fetal bovine serum） 和FCS （fetal calf serum） 是相同的意思,， 兩者都是指胎牛血清， FCS 乃錯(cuò)誤的使用字眼,， 請不要再使用,。CS （calf serum） 則是指小牛血清。HS （horseserum） 則是指馬血清,。
6,、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5 % 或10% CO2？或根本沒有影響,？
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng),， 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2 濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時(shí),，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10 % CO2,；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時(shí)， 則應(yīng)使用5 % CO2 培養(yǎng)細(xì)胞,。
7,、何時(shí)須更換培養(yǎng)基？
視細(xì)胞生長密度而定,， 或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間,，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。
8,、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素,？
除于特殊篩選系統(tǒng)中外， 一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,， 培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素,。
9、附著性細(xì)胞繼代時(shí)所使用之trypsin-EDTA 濃度,？應(yīng)如何處理,？
一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中,， 保存于–20 ℃,，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin 之活性降低， 并可減少污染之機(jī)會(huì),。
10,、懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理？
一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,， 稀釋細(xì)胞濃度即可,， 若培養(yǎng)液太多時(shí)， 可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高， 直到無法容納為止,。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,， 加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度， 重復(fù)前述步驟即可,。
11,、欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速,？
欲回收動(dòng)物細(xì)胞,， 其離心速率一般為300xg （約1,000rpm），5 - 10 分鐘,， 過高之轉(zhuǎn)速,， 將造成細(xì)胞死亡。
12,、細(xì)胞之接種密度為何,？
依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長之一重要原因,。
13,、細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何？
動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)*常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10 %DMSO （dimethyl sulfoxide） 和90 - 95 % 原來細(xì)胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之,。注意：由于DMSO 稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能,， 故不可將DMSO 直接加入細(xì)胞液中， 必須使用前先行配制完成,。
14,、DMSO 之等級和無菌過濾之方式為何？
冷凍保存使用之DMSO 等級,， 必須為Tissue culture grade之DMSO （如Sigma D2650）,， 其本身即為無菌狀況， 次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中,， 保存于4°C,， 避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO 之裂解而釋出有害物質(zhì)， 并可減少污染之機(jī)會(huì),。若要過濾DMSO,， 則須使用耐DMSO 之Nylon 材質(zhì)濾膜。
15,、冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
15,、細(xì)胞欲冷凍保存時(shí),， 細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度,？
冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1x106 cells/ml vial,， 融合瘤細(xì)胞則以5x106 cells/ml vial 為宜。
16,、應(yīng)如何避免細(xì)胞污染,？
細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌、酵母菌,、霉菌,、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因?yàn)闊o菌操作技術(shù)不當(dāng),、操作室環(huán)境不佳,、污染之血清和污染之細(xì)胞等。嚴(yán)格之無菌操作技術(shù),、清潔的環(huán)境,、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法。
17,、如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí),，應(yīng)如何處理？
加入相應(yīng)抗生素,。直接滅菌后丟棄之,。
18、支原體（mycoplasma） 污染的細(xì)胞,， 是否能以肉眼觀察出異狀,？
不能。除極有經(jīng)驗(yàn)之專家外,，大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株,，無法以其外觀分辨之。
19,、支原體污染會(huì)對細(xì)胞培養(yǎng)有何影響,？
支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長參數(shù)， 代謝及研究之任一數(shù)據(jù),。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前,，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。
20,、CO2 培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔,？
定期（至少每兩周一次） 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。
21,、為何培養(yǎng)基保存于4 ℃ 冰箱中,， 顏色會(huì)偏暗紅色， 且pH值會(huì)越來越偏堿性,？
培養(yǎng)基保存于4 ℃ 冰箱中,， 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會(huì)逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性,。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑（通常為phenol red） 的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅,。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果， 將造成細(xì)胞生長停滯或死亡,。若培養(yǎng)基偏堿時(shí),， 可以通入無菌過濾之CO2， 以調(diào)整pH 值,。
22,、各種細(xì)胞培養(yǎng)用的dish，flask是否均相同,？
不同廠牌的dish 或flask,， 其所coating 的polymer 不同， 制造程序亦不同,， 雖對大部分細(xì)胞沒有太大之影響,， 惟少數(shù)細(xì)胞則可能因使用廠牌不同之dish 或flask 而有顯著之生長差異。
23,、購買之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,，為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形？ 購買之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因,？
研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,， 常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳,。解凍過程錯(cuò)誤,。冷凍細(xì)胞解凍后， 加以洗滌細(xì)胞和離心,。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞,。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80℃太久,。
24,、收到之冷凍管瓶身破裂,，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落之原因,？
冷凍管瓶蓋裂紋,，或瓶身破裂，可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),，造成冷凍管裂損,，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,，乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,，冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),，均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊 ,。