BPH-1人前列腺增生細胞

【細胞縮寫】    BPH-1細胞

    【細胞名稱】    BPH-1(人前列腺增生細胞)

    【背景資料】    見細胞說明書

    【細胞消化時注意把握消化時間,，消化不夠會導致吹打細胞時造成損傷，一般消化時間是2-3分鐘,，但以鏡檢時大部分細胞縮回球形為準,，一般2次即可將細胞吹打下來，消化不夠進行細胞吹打易損傷細胞,。細胞系的凍存液配方：90%FBS+10%DMSO,，貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長,，細胞系可將細胞進行消化,，重懸打散細胞，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)】    細胞主要來源ATCC,、DSMZ,、ECACC、RIKEN,、promocell,、ScienCell、ECACC,、JCRB,、KCLB、Asterand,、ICLC以及少數(shù)國內(nèi)外著名大學建系

    【代次】    P4

    【規(guī)格】    復蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

    【細胞數(shù)】    1*10（6）

    【生物安全級別】    1

    【生物體】    人

    【組織來源】    前列腺

    【細胞形態(tài)】    上皮細胞樣

    【細胞特性】    貼壁

    【特別注意：如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養(yǎng),，建議添加雙抗培養(yǎng),，貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代,，請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng),，如果細胞為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天,；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天,。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡，請及時聯(lián)系實驗室技術(shù)人員會跟進解決】    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

    細胞不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌

    【培養(yǎng)條件】    詳見細胞說明書

    【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次

    【凍存條件】    詳見細胞說明書

    【主要文獻】    請具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

BPH-1人前列腺增生細胞

1)培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染,，所以我們會及時安排幫老師解決,；2)細胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封,，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱,。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底,，表明細胞活力正常,，剩余漂浮的細胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,，細胞生長至匯合度80%,，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁,，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察,，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導,，直到問題解決；3)對于生長緩慢的貼壁細胞：可采用適當?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度,，或隔日換液的方法來保證細胞的狀態(tài)和生長速度,；4)對于生長不均的貼壁細胞：在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)細胞分布明顯不均時(即某一區(qū)域細胞已重疊生長，而旁邊則為一塊空白),，此時可將細胞進行消化,，重新打散，貼壁，加入新培養(yǎng)基進行培養(yǎng),。
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞傳代方法：1：2-1：3傳代,；每周換液2-3次。
細胞傳代注意事項：①傳代培養(yǎng)時注意無菌操作并防止細胞間的交叉污染,。所有操作盡量靠近酒精燈火焰,。每次進行一種細胞的操作。每種細胞使用一套器材,；②每天觀察細胞形態(tài),，掌握好細胞是否健康的標準：健康細胞的形態(tài)飽滿，折光性好,，生長致密時即可傳代,；③如發(fā)現(xiàn)細胞有污染跡象，應立即采取措施,，一般應棄置污染的細胞,，如果必須挽救，可加含有抗生素的BBS或培養(yǎng)基反復清洗,，隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗生素,，并經(jīng)常更換培養(yǎng)基。傳代細胞的建系和維持：細胞系的維持通過換液傳代再換液,、再傳代和細胞種子凍存來實現(xiàn),。對每一個細胞系來說都有其自身的特點，要做好建系的維持必須記錄好細胞檔案,換液傳代和做好細胞系的管理工作,。培養(yǎng)細胞的凍存及復蘇：細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù),。細胞凍存在-196℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的,。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融,。
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
細胞凍存的步驟：1)選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天換液,。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)液去掉,，用0.25% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶,，加入少量新培養(yǎng)液,。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液,。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理,。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘),；2)去上清液,，加入含20%小牛血清的*培養(yǎng)基,，于4℃預冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,，用吸管輕輕吹打使細胞均勻,，細胞濃度為5×106～1×107/mL之間。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢,？答案是不一定的,，具體要看培養(yǎng)的細胞類型來選擇；3)將分裝上述細胞懸液于2ml凍存管中,，每管0.25ml,。凍存管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期,，同時作好登記(日期、細胞種類及代次,、凍存支數(shù)),；4)將裝好細胞的凍存管放到凍存盒中，-80℃冰箱過夜,。,；如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐);或者可以在4℃,，2h;然后轉(zhuǎn)到-20℃,，2h;-80℃，2h;放入液氮罐,；5)細胞凍存在液氮中可以長期保存,，但為妥善起見，凍存半年后,，取出一只凍存管細胞復蘇培養(yǎng),，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存,。