BGC823人胃癌細(xì)胞

【背景資料】    該細(xì)胞源自一位62歲的胃癌（未分化腺癌）患者,，表達(dá)CEA。

【細(xì)胞來(lái)源】    細(xì)胞主要來(lái)源ATCC,、DSMZ,、ECACC、RIKEN,、promocell,、ScienCell、ECACC,、JCRB,、KCLB、Asterand,、ICLC以及少數(shù)國(guó)內(nèi)外著名大學(xué)建系

【代次】    P4

【規(guī)格】    復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

BGC823人胃癌細(xì)胞

1)培養(yǎng)瓶有破裂,，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決,；2)細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱,。次日觀察,，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常,，剩余漂浮的細(xì)胞可以離心去掉,，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度80%,，進(jìn)行消化傳代,；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo),，直到問(wèn)題解決,；3)對(duì)于生長(zhǎng)緩慢的貼壁細(xì)胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度,，或隔日換液的方法來(lái)保證細(xì)胞的狀態(tài)和生長(zhǎng)速度；4)對(duì)于生長(zhǎng)不均的貼壁細(xì)胞：在培養(yǎng)過(guò)程中若出現(xiàn)細(xì)胞分布明顯不均時(shí)(即某一區(qū)域細(xì)胞已重疊生長(zhǎng),，而旁邊則為一塊空白),，此時(shí)可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重新打散,，貼壁,，加入新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
細(xì)胞物種來(lái)源：人源或鼠源等其它物種來(lái)源
細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代,；每周換液2-3次。
細(xì)胞傳代注意事項(xiàng)：①傳代培養(yǎng)時(shí)注意無(wú)菌操作并防止細(xì)胞間的交叉污染,。所有操作盡量靠近酒精燈火焰,。每次進(jìn)行一種細(xì)胞的操作。每種細(xì)胞使用一套器材,；②每天觀察細(xì)胞形態(tài),，掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn)：健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿，折光性好,，生長(zhǎng)致密時(shí)即可傳代,；③如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染跡象，應(yīng)立即采取措施,，一般應(yīng)棄置污染的細(xì)胞,，如果必須挽救，可加含有抗生素的BBS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗,，隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗生素,，并經(jīng)常更換培養(yǎng)基。傳代細(xì)胞的建系和維持：細(xì)胞系的維持通過(guò)換液傳代再換液,、再傳代和細(xì)胞種子凍存來(lái)實(shí)現(xiàn),。對(duì)每一個(gè)細(xì)胞系來(lái)說(shuō)都有其自身的特點(diǎn)，要做好建系的維持必須記錄好細(xì)胞檔案,換液傳代和做好細(xì)胞系的管理工作,。培養(yǎng)細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇：細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù),。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中，儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無(wú)限的,。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融,。
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)
細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
細(xì)胞凍存的步驟：1)選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，在凍存前一天換液,。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉,，用0.25% 胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶,，加入少量新培養(yǎng)液,。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,，使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理,。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,，10分鐘)；2)去上清液,，加入含20%小牛血清的*培養(yǎng)基,，于4℃預(yù)冷15分鐘后，逐滴加入已無(wú)菌的DMSO或甘油,，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,，細(xì)胞濃度為5×106～1×107/mL之間。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢,？答案是不一定的,，具體要看培養(yǎng)的細(xì)胞類型來(lái)選擇；3)將分裝上述細(xì)胞懸液于2ml凍存管中,，每管0.25ml,。凍存管要將蓋子蓋緊，并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,，同時(shí)作好登記(日期,、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù)),；4)將裝好細(xì)胞的凍存管放到凍存盒中,，-80℃冰箱過(guò)夜。,；如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過(guò)夜,，放入液氮罐);或者可以在4℃，2h;然后轉(zhuǎn)到-20℃,，2h;-80℃,，2h;放入液氮罐；5)細(xì)胞凍存在液氮中可以長(zhǎng)期保存,，但為妥善起見(jiàn),，凍存半年后，取出一只凍存管細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),，觀察生長(zhǎng)情況,，然后再繼續(xù)凍存。