Bel-7405人肝癌細(xì)胞

細(xì)胞縮寫： Bel-7405細(xì)胞

細(xì)胞名稱：  Bel-7405(人肝癌細(xì)胞)

細(xì)胞來源：    細(xì)胞主要來源ATCC,、DSMZ、ECACC,、RIKEN,、promocell、ScienCell,、ECACC,、JCRB、KCLB,、Asterand,、ICLC以及少數(shù)國內(nèi)外著名大學(xué)建系

Bel-7405人肝癌細(xì)胞

1)培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會污染,，所以我們會及時安排幫老師解決,；2)細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封,，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱,。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,，表明細(xì)胞活力正常,，剩余漂浮的細(xì)胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,，細(xì)胞生長至匯合度80%,，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁,，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察,，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo),，直到問題解決；3)對于生長緩慢的貼壁細(xì)胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度,，或隔日換液的方法來保證細(xì)胞的狀態(tài)和生長速度；4)對于生長不均的貼壁細(xì)胞：在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)細(xì)胞分布明顯不均時(即某一區(qū)域細(xì)胞已重疊生長,，而旁邊則為一塊空白),，此時可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重新打散,，貼壁,，加入新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),。
細(xì)胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次,。
細(xì)胞傳代注意事項：①傳代培養(yǎng)時注意無菌操作并防止細(xì)胞間的交叉污染,。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次進(jìn)行一種細(xì)胞的操作,。每種細(xì)胞使用一套器材,；②每天觀察細(xì)胞形態(tài)，掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn)：健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿,，折光性好,，生長致密時即可傳代；③如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染跡象,，應(yīng)立即采取措施,，一般應(yīng)棄置污染的細(xì)胞，如果必須挽救,，可加含有抗生素的BBS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗,，隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗生素，并經(jīng)常更換培養(yǎng)基,。傳代細(xì)胞的建系和維持：細(xì)胞系的維持通過換液傳代再換液,、再傳代和細(xì)胞種子凍存來實現(xiàn)。對每一個細(xì)胞系來說都有其自身的特點,，要做好建系的維持必須記錄好細(xì)胞檔案,換液傳代和做好細(xì)胞系的管理工作,。培養(yǎng)細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇：細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中,，儲存時間幾乎是無限的,。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)
細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書
細(xì)胞凍存的步驟：1)選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,，在凍存前一天換液,。將多個培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化,。適時去掉胰蛋白酶,，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,，使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液,。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,，10分鐘),；2)去上清液，加入含20%小牛血清的*培養(yǎng)基,，于4℃預(yù)冷15分鐘后,，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，細(xì)胞濃度為5×106～1×107/mL之間,。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢,？答案是不一定的，具體要看培養(yǎng)的細(xì)胞類型來選擇,；3)將分裝上述細(xì)胞懸液于2ml凍存管中,，每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊,，并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,，同時作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次,、凍存支數(shù)),；4)將裝好細(xì)胞的凍存管放到凍存盒中，-80℃冰箱過夜,。,；如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐);或者可以在4℃,，2h;然后轉(zhuǎn)到-20℃,，2h;-80℃，2h;放入液氮罐,；5)細(xì)胞凍存在液氮中可以長期保存,，但為妥善起見，凍存半年后,，取出一只凍存管細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存,。