BGC-823人胃腺癌細胞（低分化）

當密度達到傳代密度且細胞活性在90%以上時,，可以凍存細胞，在超凈臺中將要凍存的細胞移入離心管,，1000rpm離心5min,，棄上清，用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細胞,，并調整細胞密度為4-6×106/ml,，將細胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。

含量：>1x10⁶ 個/mL,，  規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

培養(yǎng)基：RPMI-1640(GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L),，90%；胎牛血清,，10%,。 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度。

生長特性：貼壁生長

污染：支原體,、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸,，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇,；（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長,，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

BGC-823人胃腺癌細胞（低分化）

傳代操作步驟：

一,、貼壁細胞傳代

1.提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱,，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),。

2.吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞,。

3.加入適量胰酶,，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育,，每隔2~3min顯微鏡下觀察,，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,，加入新鮮培養(yǎng)基,，晃動細胞瓶，終止胰酶作用,。

4.用吸管小心吹打貼壁的細胞,，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡。

5.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況,。

二,、懸浮細胞傳代

1.將細胞懸液轉移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min,。

2.棄去上清,，加入新鮮的培養(yǎng)基,，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液,。

3.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng),。

培養(yǎng)的過程中,，經(jīng)常見到黑色的顆粒或小黑點,，這種情況是怎么引起的呢,？該怎么避免呢？原因：

黑點,，大概有細胞本身帶的,，環(huán)境有的，還有人身上帶進細胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基

1,、如果小黑點有增殖趨勢,，那么就有可能是污染了，需要處理,；

2,、如果小黑點沒有增殖趨勢，且不影響細胞生長,，也不影響實驗的話,，則可能

 a、是“黑膠蟲”,，黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物,，本身就存在爭議。有人認為是從血清中來的一種原蟲,，也有人認為是細菌,，或是真菌，也有人認為是血清中的蛋白的結晶,。“黑膠蟲”可寄生于動物細胞,，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生,，并隨細胞傳代而傳代,。“黑膠蟲”與細胞競爭性生長，開始時對細胞并沒有什么影響,，但當黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時候,， 細胞生長就會受到影響直至死亡，嚴重影響了科研活動的開展和進行。以前（這個至少是10年以前）,，很多實驗室在養(yǎng)細胞時用國產(chǎn)血清,，那時的血清可能質量不過關，有所謂的“黑膠蟲”,，但是也沒有明確的鑒定,。但是現(xiàn)在的血清，即使國產(chǎn)的,，產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見了,。

 b、是細胞碎片,，或血清里德沉淀析出，在做布朗運動,。

 c,、是核糖體，也可能是雜質ZYC3194    人宮頸癌腸轉移細胞    Ca Ski    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3195    人子宮鱗癌細胞（高分化）    HCC 94 [HCC941122]    形態(tài)：貼壁，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3196    人子宮內(nèi)膜腺癌細胞    HEC-1-B    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3197    人卵巢癌細胞    SK-OV-3    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3198    人卵巢透明細胞癌    ES-2    形態(tài)：貼壁，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3199    人乳腺癌細胞    HCC1937    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3200    人胎盤絨毛癌細胞    JAR    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3201    人羊膜細胞    WISH    形態(tài)：貼壁，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3202    人整合SV40基因的乳腺上皮細胞    HBL-100    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3203    人乳腺癌細胞    Hs 578T    形態(tài)：貼壁,，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3204    人乳腺癌細胞    MCF7 [MCF-7]    形態(tài)：貼壁，懸浮均有,；上皮細胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS