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人正常膀胱上皮細(xì)胞(SV-HUC-1)

細(xì)胞介紹

這株細(xì)胞是正常輸尿管組織用SV40病毒轉(zhuǎn)染建株的,。反復(fù)用非洲綠猴腎細(xì)胞平 板測(cè)試檢測(cè)傳染性SV40的生成，結(jié)果都呈陰性,。

細(xì)胞特性

1)來(lái)源：膀胱

2)形態(tài)：上皮細(xì)胞

3)含量：>lxl06 個(gè)/mL

4)污染：支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞,。收到細(xì)胞后,， 可在1000RPM，常溫條件下,，離心5min后,，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入推薦 使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至l〇cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng) 狀態(tài)良好時(shí),，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1.準(zhǔn)備 F-12K 培養(yǎng)基（GIBCO，21127-022),，90%;胎牛血清,，10%。

2.培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%;二氧化碳,，5%。溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%,。

3. 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存,。

2)細(xì)胞處理：

復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入l〇cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢 查細(xì)胞密度,。

細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培

養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部 分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止 消化,。

按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者

細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，棄 去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入約lml含血清的培養(yǎng)基后 加入凍存管中,，再添加1〇%DMSO后進(jìn)行凍存,。

注意事項(xiàng)：

收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立 即與我們聯(lián)系,。

所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注 意防護(hù),，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

瓶中。