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培養(yǎng)細(xì)胞為啥總是一言不合就抱團(tuán)
細(xì)胞為啥總是一言不合就抱團(tuán)生長(zhǎng)？！
是細(xì)胞污染了還是正?，F(xiàn)象？
是消化不好了還是鋪板有問(wèn)題,？
抱團(tuán)細(xì)胞越來(lái)越多,，怎么樣才能讓細(xì)胞分開生長(zhǎng)？
請(qǐng)認(rèn)真閱讀以下干貨,，看看能否幫您答疑解惑,！
細(xì)胞抱團(tuán)一定代表細(xì)胞狀態(tài)不好嗎？
細(xì)胞生長(zhǎng)的時(shí)候肯定是要相互聯(lián)系,，大部分的細(xì)胞都是要成片生長(zhǎng)的,，應(yīng)該仔細(xì)觀察每種細(xì)胞的狀態(tài)，抱團(tuán)并不一定代表不好：
1,，若細(xì)胞輪廓清晰,，可看清楚一個(gè)個(gè)的細(xì)胞，像葡萄一樣,，一串串的,，就是狀態(tài)好的，說(shuō)明細(xì)胞在分裂,。
2,，但大部分細(xì)胞抱團(tuán)不是一件好事！如果輪廓消失,，出現(xiàn)細(xì)胞融解或細(xì)胞變灰暗,、透光性變差，就是細(xì)胞死亡了,。葡萄狀和抱團(tuán),，在鏡下其實(shí)很容易區(qū)別,。抱團(tuán)死亡的細(xì)胞可以看到細(xì)胞碎片，如下圖：
3,，細(xì)胞抱團(tuán)是因?yàn)榧?xì)胞污染了嗎,？一般細(xì)胞培養(yǎng)液清亮，就不是污染,。如果是污染了的話,，你看培養(yǎng)液顏色就能夠看出來(lái)，很渾濁的那種,。
細(xì)胞為啥總是喜歡抱團(tuán),？
1，細(xì)胞死亡釋放出DNA,，纏繞其他細(xì)胞,，形成黏性的細(xì)胞團(tuán)（消化的過(guò)程可能過(guò)于粗暴，吹打太用力,，消化太久,，消化液太強(qiáng)或有毒性等）。
2,，細(xì)胞離心速度過(guò)大或時(shí)間太長(zhǎng),。
3，消化不*的時(shí)候,，細(xì)胞和細(xì)胞之間的連接沒有分開,；消化過(guò)度的時(shí)候，圓形的細(xì)胞容易聚堆,，再分開很困難,！
4，狀態(tài)不好,、老化的細(xì)胞，也可能會(huì)出現(xiàn)抱團(tuán)生長(zhǎng)的情況（比如換液不及時(shí),、長(zhǎng)的太滿才傳代,、污染等造成的細(xì)胞狀態(tài)）。
5,，傳代后細(xì)胞鋪板不均勻,。
如何避免細(xì)胞抱團(tuán)？
1,，用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞,。
2，對(duì)于貼壁非常牢固的細(xì)胞（如MDCK）,，為了細(xì)胞更好的狀態(tài),，更漂亮的樣子,，建議分多批多次消化，這樣才能大限度地將胰酶對(duì)細(xì)胞的損傷降到低,，保證細(xì)胞的狀態(tài)能夠好看,。
3，細(xì)胞生長(zhǎng)密度不要太高,，70%－80％就好（細(xì)胞剛剛基本成單層細(xì)胞,，沒有出現(xiàn)成層生長(zhǎng)），這樣細(xì)胞抱團(tuán)的幾率就大大減少了,。如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)成集落,，可先將細(xì)胞低密度傳代，第二天再消化傳代,，這樣連續(xù)傳三次,，細(xì)胞抱團(tuán)的就越來(lái)越小，這樣幾代過(guò)后,，再按照常規(guī)消化方法和時(shí)間能將細(xì)胞逐漸傳成單個(gè)的,。
4，消化過(guò)程中不要使勁搖動(dòng)培養(yǎng)瓶,，這樣細(xì)胞特別容易成屑樣脫落,。細(xì)胞一旦脫落入懸液里就很難再將他吹打成單個(gè)（因?yàn)榧?xì)胞沒有受力點(diǎn)了，所以細(xì)胞很難分散開）,。所以必須要在細(xì)胞未脫落之前將其吹打開,，嚴(yán)格控制好消化程度。
細(xì)胞抱團(tuán)了,，要如何處理,？
1，如果細(xì)胞抱團(tuán)不影響生長(zhǎng)就沒問(wèn)題,，只是計(jì)數(shù)的時(shí)候要麻煩點(diǎn)了,。在消化的時(shí)候在細(xì)胞由多角形變成圓型之前，就用手輕磕培養(yǎng)瓶的側(cè)壁,，使細(xì)胞從壁上脫落,，就可以了！——不要吹打,，對(duì)細(xì)胞性狀和生長(zhǎng)都不好,。
2，如果感覺有死細(xì)胞的DNA,，在細(xì)胞懸液中加入幾滴無(wú)菌的DNAse(1mg/ml溶于水)將DNA鏈打斷,。輕柔地吹打細(xì)胞，防止對(duì)細(xì)胞膜造成物理?yè)p傷,。
3,，如果細(xì)胞抱團(tuán)是肉眼可見的,，那就讓細(xì)胞靜置半分鐘左右，然后吸取上半部分沒有抱團(tuán)的細(xì)胞懸液來(lái)傳代,。如果細(xì)胞抱團(tuán)肉眼不可見,，那可能沒有特別好的分離方法，只能等細(xì)胞狀態(tài)改善后將這部分細(xì)胞慢慢排除出去,。
總結(jié)
引起細(xì)胞抱團(tuán)的根本原因是細(xì)胞狀態(tài)變差,，且在吹打細(xì)胞的時(shí)候，那些狀態(tài)好的細(xì)胞也會(huì)因?yàn)槎啻未荡蚨軗p,，所以我們認(rèn)為根本的解決方法是摸透培養(yǎng)的細(xì)胞的生長(zhǎng)習(xí)性,，讓細(xì)胞保持較好的生長(zhǎng)狀態(tài)。