原代細胞分離與培養(yǎng)方法介紹
凡是來源于胚胎,、組織器官及外周血,,經特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細胞稱之為原代細胞。原代細胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細胞在體外進行的培養(yǎng),,是建立細胞系的DI一步,,是一項基本技術。
原代細胞接近和能反映體內生長特性,,適宜用于藥物敏感性試驗,、細胞分化等實驗研究。
方法
1. 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。
其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
2. 消化培養(yǎng)法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀),,應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動,,使團塊膨松,由塊狀變成絮狀,,此時再采用機械法,,用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩,使細胞團塊得以較充分的分散,,制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液,,接種培養(yǎng)后,細胞容易貼壁生長,。
3. 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,,如白血病細胞、淋巴細胞,、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
4. 器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,
器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用,。