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使用血清應該注意的事項
關于血清使用的幾點建議
1,、 血清必須貯存-20℃,，如存放于4℃,，請勿超過兩周,，對于某些單位一次無法用完一瓶，可在無菌條件下將其40-45ml分裝于無菌50ml離心管中（或血清瓶中）,，由于血清解凍時體積會增加10％,，必須預留此膨脹體積的空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂的情形,。
2,、一般公司所提供的血清一般為200ml和500ml裝量，因此建議在使用中宜采取逐步解凍的方法解凍血清：-20℃→4℃冰箱或冷庫溶解24小時→室溫下全溶后再分裝,，一般以50 ml無菌離心管中分裝40-45 ml,。使用過程中要特別注意，必須規(guī)則地將血清搖晃均勻,，小心勿造成氣泡,，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生,。勿直接由-20℃放置至37℃環(huán)境下解凍,，因為溫度改變太大，溶易造成蛋白質(zhì)凝結而產(chǎn)生沉淀,。
3,、血清的滅活（heat-inactivation）一般是指56℃，30分鐘水浴加熱已*解凍的血清,，加熱過程中必須規(guī)則地搖晃均勻,。此處理的目的是使血清中的補體成分(complement)去活化,。但是，經(jīng)過滅活處理的血清會因而造成沉淀的顯著增多,，且會影響血清的品質(zhì),。所以，有的公司所生的細胞培養(yǎng)用牛血清不做滅活處理,，由客戶自行選擇,。而診斷試劑用血清在除菌過濾前進行過滅活處理。
4,、在使用血清的時候,，勿將血清留置于37℃太久，血清會變得混濁,，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分會因而受到破壞,，影響血清的品質(zhì)。
5一般我們在使用過程中是先過濾培養(yǎng)基,，再加血清,，勿直接過濾血清。
6,、 血清的沉淀物
1. 凝絮物：其產(chǎn)生的原因有多種,，但普遍的原因是血清中的脂蛋白（lipoprotein）變形及解凍后血清中存在的纖維蛋白（fibrin）造成，這些凝絮沉淀物不會影響血清本身的品質(zhì),。除非必須,，如果您想減少這些沉淀物，建議可用離心3000rpm,5min去除,，或離心后取上清液加入培養(yǎng)基中一起除菌過濾,。
2. 顯微鏡下觀察“小黑點”，通常經(jīng)過熱處理的血清,，沉淀物的形成會顯著增多,。有些沉淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”，常會誤認為是血清遭受污染（如黑膠蟲）,，而將血清放置在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,，但37℃環(huán)境下，又會使此沉淀物增多,，更會誤認為微生物的增殖,，但以培養(yǎng)細菌的培養(yǎng)基檢測，又沒有污染,。一般而言,，此小黑點不會影響細胞的生長。
血清質(zhì)量的決定因素
1,、 關于牛種
血清質(zhì)量與牛種沒有必然的聯(lián)系,，但有其先天條件,。
首先，澳大利亞,、新西蘭的牛源之所以被*,，原因是這些國家的牛源是“無污染”的，“無污染”的實際含義是：病毒等外源因子污染較少,。至于美國,，由于其國內(nèi)出現(xiàn)了瘋牛病，其形象由此受到挑戰(zhàn),。這種血清安全性的觀念在發(fā)達國家認知度較高,，而在我國還不夠重視。
其次,，牛所能獲得的營養(yǎng) 對血清質(zhì)量有影響。在我國,，由于飼養(yǎng)條件的不同,， 不同地區(qū)產(chǎn)的血清質(zhì)量是有差異的。
2,、 質(zhì)量標準件的問題
我國對人用生物制品生產(chǎn)所用的牛血清制定了國家標準,，載于《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準》2000年版，此標準已接近于國外胎牛血清的有關標準,。內(nèi)毒素：國家標準件為不高于10Eu/ml,內(nèi)控標準件為不高5Eu/ml或10Eu/ml.國家標準之外的質(zhì)控指標還有：免疫球蛋白,、牛腹瀉病毒（BVDV）抗體、激素,、和牛源安全性驗證等,。
3、 牛血清的命名和選擇
一般公司對細胞培養(yǎng)用牛血清的命名分二類：胎牛血清和小牛血清,。對于一般的細胞系,，小牛血清可以培養(yǎng)的很好。
關于牛血清白蛋白的生產(chǎn)工藝
牛血清白蛋白的制備方法有Cohn′s法,、鹽析法,、熱變性法等多種工藝。不同的生產(chǎn)工藝其產(chǎn)品的名稱,、質(zhì)量指標,、應用領域等各不相同。
其中Cohn′s法設備,、工藝要求比較高,，相對應的生產(chǎn)成本較高，但產(chǎn)品質(zhì)量較好,。牛血清組份V（FrationV）就是由Cohn′s法制備的,。一般白蛋白純度96-99%,、外觀潔白、結晶性狀好,、1%蛋白水溶液PH7.0±0.2,，再根據(jù)不同的應用分成低內(nèi)毒素、低脂肪酸等等的不產(chǎn)品,，主要應用于細胞培養(yǎng)領域的無血清培養(yǎng)基中,。鹽析法因生產(chǎn)周期長，純度低和產(chǎn)品聚合體高,、穩(wěn)定性低等缺陷已很少應用,。
目前國內(nèi)應用比較普遍的是熱變性法，結合較先進的超濾生產(chǎn)工藝,，其工藝要求相對較低,，制備成本低，其缺點是目前應用領域比較單一,，僅供免疫診斷試劑使用,。