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細(xì)胞不貼壁,、生長緩慢、生長不好,、甚至死亡的可能原因及解決方法
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會(huì)出現(xiàn)這樣或那樣的問題,，客戶遇到的問題從細(xì)胞生長角度來說，針對細(xì)胞不貼壁,、生長緩慢,、生長不好，甚至死亡的原因,，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法,。
一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁
可能原因：
●胰蛋白酶消化過度
●支原體污染
●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）
●細(xì)胞老化
●接種細(xì)胞起始濃度太低或太高
解決方法：
●縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度
●分離培養(yǎng)物,，檢測支原體,。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,，丟棄培養(yǎng)物,。
●使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2
●啟用新的保種細(xì)胞
●調(diào)節(jié)接種細(xì)胞濃度
二,、懸浮細(xì)胞成簇
可能原因：
●培養(yǎng)液中含鈣,、鎂離子,；
●支原體污染；
●蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解,；
●DNA污染
解決方法：
●用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞,，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液；
●分離培養(yǎng)物,，檢測支原體,；
●用DNaseI處理細(xì)胞
三、培養(yǎng)細(xì)胞生長緩慢
可能原因：
●由于更換不同培養(yǎng)液或血清,；
●培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞,；
●培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；
●試劑保存不當(dāng),；
●接種細(xì)胞起始濃度太低,；
●細(xì)胞已老化；
●支原體污染
解決方法：
●比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn),，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；
●換入新鮮配置培養(yǎng)液,，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長因子,；
●用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染,，丟棄培養(yǎng)物,；
●血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存,。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存,，需在1周內(nèi)用完；
●增加接種細(xì)胞起始濃度,；
●換用新的保種細(xì)胞,；
●分離培養(yǎng)物，檢測支原體,。清潔支架和培養(yǎng)箱,。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物,。
四,、培養(yǎng)細(xì)胞生長不好
可能原因：
●細(xì)胞本身的狀態(tài)
細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化,；
細(xì)胞的接種量：接種量過低,，細(xì)胞生長緩慢；
細(xì)胞傳代時(shí)間過晚：細(xì)胞中毒,，影響傳代后的細(xì)胞生長,；
胰酶消化時(shí)間過長或過短：時(shí)間過長,，細(xì)胞死亡；時(shí)間過短,，細(xì)胞未*分離而成團(tuán),，細(xì)胞死亡；
細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速融,。
●污染
支原體污染
霉菌污染
●培養(yǎng)基或血清
更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證
選擇的培養(yǎng)基是否合適
培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤
●培養(yǎng)環(huán)境
CO2供應(yīng)是否正常
培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確
…………
解決方法：
根據(jù)以上四個(gè)方面的可能原因,，做出針對性的解決方案
●注意細(xì)胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等,；
●避免產(chǎn)生污染（用正規(guī),、合法、可溯源的血清）
●要用合適的血清或培養(yǎng)基,，需要經(jīng)過驗(yàn)證
●注意實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境
五,、培養(yǎng)細(xì)胞死亡
可能原因：
●培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2；
●培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大,；
●細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷,；
●培養(yǎng)液滲透壓不正確；
●培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積
解決方法：
●檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2,；
●檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度,；
●取新的保存細(xì)胞種；
●檢測培養(yǎng)液滲透壓,；
●換入新鮮培養(yǎng)液