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深度挖墳,，細胞培養(yǎng)體系的那些老知識
一,、基礎(chǔ)培養(yǎng)基
絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在平衡鹽溶液(BSS)基礎(chǔ)上,，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì),。廣泛應(yīng)用的培養(yǎng)基是Eearle`s MEM 的混合物,，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素,。而Ham`s F12 也包括非必須氨基酸,，維生素的范圍亦很廣，另外常規(guī)含有無機鹽和代謝添加劑（例如核苷酸）,。MEM/F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2,，形成神經(jīng)生物學(xué)通用的培養(yǎng)基。Dulbecco`s改良培養(yǎng)基——DMEM,，現(xiàn)應(yīng)用于快速生長的細胞,，同MEM含有相同的營養(yǎng)成分，但濃度高出2~4倍,。選擇某種培養(yǎng)基,，應(yīng)仔細了解成分表，應(yīng)知道大多數(shù)情形下培養(yǎng)基都有不足,。例如,，有些培養(yǎng)基在氨基酸中包括有谷氨酸，而這種培養(yǎng)基雖廣泛用于神經(jīng)生物學(xué)領(lǐng)域,，但它對某些對谷氨酸敏感的可能有細胞外毒性損傷的神經(jīng)元而言,，則并非是很好的選擇，特別是如果神經(jīng)元生長在缺乏膠質(zhì)的環(huán)境中時,。F12中含有硫酸亞鐵,，據(jù)報道也有神經(jīng)毒效應(yīng)。
在所有這些培養(yǎng)基中,，谷氨酸比其他氨基酸有更高的濃度,，這是因為它具有不穩(wěn)定性以及在許多細胞培養(yǎng)中它常用作碳源。對于神經(jīng)元的培養(yǎng)常常在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培養(yǎng)基中這兩種物質(zhì)缺乏時）。MEM與F12均要用5%的CO2來平衡,，DMEM含更高濃度的NaCO3,，要用10%的CO2來平衡，當(dāng)然也可以在較低CO2濃度下使用,。這些基礎(chǔ)培養(yǎng)基的組成成分是建立在對不同細胞系生長的研究之上的,，但通常在原代培養(yǎng)中使用也能有比較令人滿意的結(jié)果。
原則上,，HEPES作為緩沖劑可用來代替碳酸氫鹽，以解除需要高濃度CO2培養(yǎng)環(huán)境的限制,。實際操作中并非如此簡單,。顯然，溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細胞生長是重要的,。Leiboviz`s L15培養(yǎng)基可用來在大氣環(huán)境中令神經(jīng)細胞生長,，該培養(yǎng)基采用了與眾不同的BSS作基礎(chǔ)，它含有高濃度的氨基酸來提高緩沖能力,，培養(yǎng)基中使用半乳糖作碳源,，以阻止培養(yǎng)基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代謝產(chǎn)生,。這一培養(yǎng)基的優(yōu)點是明顯的,，特別是在保持較高CO2有困難時，例如在長時間的顯微操作及生理學(xué)研究中,。L15培養(yǎng)基已用來成功的培養(yǎng)了外周神經(jīng)元,，但尚未在CNS神經(jīng)元的發(fā)育研究中全面檢測過。
二,、血清
細胞在單純的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中不能存活,，在特殊類型的細胞培養(yǎng)中必須提供某些痕量營養(yǎng)物質(zhì)及生長因子才能使細胞得以生長并維持生長狀態(tài)?；A(chǔ)培養(yǎng)基常常要添加血清,，血清終濃度多為5~20%。特殊用途的血清來源須用經(jīng)驗確定,，廣泛應(yīng)用的血清種類有馬血清與胎牛血清,。胎牛血清中富含有絲分裂因子，常選其作增殖細胞用的血清,，也用于細胞系和原代培養(yǎng),。而馬血清常常用來作有絲分裂后的神經(jīng)元培養(yǎng)。然而,，很多人也將胎牛血清用于神經(jīng)元培養(yǎng),，也有人用馬血清來培養(yǎng)膠質(zhì)細胞。用大鼠進行神經(jīng)元培養(yǎng)的某些研究者喜歡使用同型血清；人類的胎盤血清,，亦曾用于神經(jīng)組織的器官類型的培養(yǎng),，也用在一些特殊培養(yǎng)種類中。
血清的不同批號含有不同的成分,，所以許多人發(fā)現(xiàn),，應(yīng)該在使用前對血清進行測試。大多數(shù)試劑商提供樣品,，所滿意的批號即可選用,，這樣可以一次得到足夠一年用量的血清。