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深度挖墳,，細胞培養(yǎng)體系的那些老知識
一、基礎培養(yǎng)基
絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在平衡鹽溶液(BSS)基礎上,，添加了氨基酸,、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質。廣泛應用的培養(yǎng)基是Eearle`s MEM 的混合物,，其中含有13種必須氨基酸,、8種維生素。而Ham`s F12 也包括非必須氨基酸,，維生素的范圍亦很廣,，另外常規(guī)含有無機鹽和代謝添加劑（例如核苷酸）,。MEM/F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2，形成神經(jīng)生物學通用的培養(yǎng)基,。Dulbecco`s改良培養(yǎng)基——DMEM,，現(xiàn)應用于快速生長的細胞，同MEM含有相同的營養(yǎng)成分,，但濃度高出2~4倍,。選擇某種培養(yǎng)基，應仔細了解成分表,，應知道大多數(shù)情形下培養(yǎng)基都有不足,。例如，有些培養(yǎng)基在氨基酸中包括有谷氨酸,，而這種培養(yǎng)基雖廣泛用于神經(jīng)生物學領域,，但它對某些對谷氨酸敏感的可能有細胞外毒性損傷的神經(jīng)元而言，則并非是很好的選擇,，特別是如果神經(jīng)元生長在缺乏膠質的環(huán)境中時,。F12中含有硫酸亞鐵，據(jù)報道也有神經(jīng)毒效應,。
在所有這些培養(yǎng)基中,，谷氨酸比其他氨基酸有更高的濃度，這是因為它具有不穩(wěn)定性以及在許多細胞培養(yǎng)中它常用作碳源,。對于神經(jīng)元的培養(yǎng)常常在基礎培養(yǎng)基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培養(yǎng)基中這兩種物質缺乏時）,。MEM與F12均要用5%的CO2來平衡，DMEM含更高濃度的NaCO3,，要用10%的CO2來平衡,，當然也可以在較低CO2濃度下使用。這些基礎培養(yǎng)基的組成成分是建立在對不同細胞系生長的研究之上的,，但通常在原代培養(yǎng)中使用也能有比較令人滿意的結果,。
原則上,，HEPES作為緩沖劑可用來代替碳酸氫鹽,，以解除需要高濃度CO2培養(yǎng)環(huán)境的限制。實際操作中并非如此簡單,。顯然,，溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細胞生長是重要的。Leiboviz`s L15培養(yǎng)基可用來在大氣環(huán)境中令神經(jīng)細胞生長,，該培養(yǎng)基采用了與眾不同的BSS作基礎,，它含有高濃度的氨基酸來提高緩沖能力，培養(yǎng)基中使用半乳糖作碳源,，以阻止培養(yǎng)基中乳酸形成,，少量溶解的CO2由丙酮酸代謝產(chǎn)生,。這一培養(yǎng)基的優(yōu)點是明顯的，特別是在保持較高CO2有困難時,，例如在長時間的顯微操作及生理學研究中,。L15培養(yǎng)基已用來成功的培養(yǎng)了外周神經(jīng)元，但尚未在CNS神經(jīng)元的發(fā)育研究中全面檢測過,。
二,、血清
細胞在單純的基礎培養(yǎng)基中不能存活，在特殊類型的細胞培養(yǎng)中必須提供某些痕量營養(yǎng)物質及生長因子才能使細胞得以生長并維持生長狀態(tài),?；A培養(yǎng)基常常要添加血清，血清終濃度多為5~20%,。特殊用途的血清來源須用經(jīng)驗確定,，廣泛應用的血清種類有馬血清與胎牛血清。胎牛血清中富含有絲分裂因子,，常選其作增殖細胞用的血清,，也用于細胞系和原代培養(yǎng)。而馬血清常常用來作有絲分裂后的神經(jīng)元培養(yǎng),。然而,，很多人也將胎牛血清用于神經(jīng)元培養(yǎng)，也有人用馬血清來培養(yǎng)膠質細胞,。用大鼠進行神經(jīng)元培養(yǎng)的某些研究者喜歡使用同型血清,；人類的胎盤血清，亦曾用于神經(jīng)組織的器官類型的培養(yǎng),，也用在一些特殊培養(yǎng)種類中,。
血清的不同批號含有不同的成分，所以許多人發(fā)現(xiàn),，應該在使用前對血清進行測試,。大多數(shù)試劑商提供樣品，所滿意的批號即可選用,，這樣可以一次得到足夠一年用量的血清,。