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上海易匯生物科技有限公司

Bio-Rad 1658026 垂直通用電泳系統(tǒng)套裝

時(shí)間:2025-5-21閱讀:114
Bio-Rad 1658026 垂直通用電泳系統(tǒng)套裝用戶指南
產(chǎn)品概述
Bio-Rad 1658026 垂直通用電泳系統(tǒng)套裝專為科研人員設(shè)計(jì),在蛋白與核酸的電泳分離實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn),。該套裝主要由 Mini-PROTEAN Tetra 垂直電泳槽與 PowerPac Universal 電源供應(yīng)器組成,,能夠同時(shí)運(yùn)行 1 至 4 塊迷你凝膠,,適用于預(yù)制膠,、手工灌制膠等多種類型,滿足不同實(shí)驗(yàn)需求 ,。
技術(shù)原理
垂直電泳是借助電場(chǎng)力推動(dòng)帶電分子,,使其在垂直放置的凝膠介質(zhì)中遷移,從而實(shí)現(xiàn)分離的技術(shù) ,。凝膠一般由聚丙烯酰胺或瓊脂糖構(gòu)成,,分子在凝膠內(nèi)的遷移速率受到多因素影響:
  1. 分子電荷特性:分子所帶電荷的數(shù)量與性質(zhì)決定其在電場(chǎng)中的受力方向和大小。例如,,帶正電荷的分子會(huì)向負(fù)極遷移,,帶負(fù)電荷的分子則向正極移動(dòng),電荷量越多,,遷移速度越快 ,。

  1. 分子量與形狀:相對(duì)分子質(zhì)量較小的分子在凝膠孔隙中更容易穿行,遷移速度較快,;而分子形狀也有影響,,比如同等分子量下,球狀分子比線性分子遷移速度更快 ,。

  1. 凝膠孔徑:凝膠孔徑大小由其濃度和交聯(lián)度控制,。高濃度的聚丙烯酰胺凝膠孔徑小,適合分離小分子,;低濃度凝膠孔徑大,,有利于大分子的分離 。

  1. 緩沖液性質(zhì):緩沖液的導(dǎo)電性和 pH 值至關(guān)重要,。合適的導(dǎo)電性能夠保證電場(chǎng)穩(wěn)定,而 pH 值則影響分子的帶電狀態(tài) ,。例如,在蛋白質(zhì)電泳中,SDS-PAGE 緩沖液體系能夠使蛋白質(zhì)變性并帶上負(fù)電荷,從而實(shí)現(xiàn)按分子量大小分離 ,。

Mini-PROTEAN Tetra 垂直電泳槽通過優(yōu)化設(shè)計(jì),,為分子遷移營(yíng)造了穩(wěn)定,、均勻的電場(chǎng)環(huán)境,,提升了分離的分辨率和實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性 ,。PowerPac Universal 電源供應(yīng)器則為電泳過程提供精準(zhǔn)可控的電壓、電流和功率輸出 ,。
產(chǎn)品特點(diǎn)
  1. 高效靈活的電泳槽

  • 多凝膠運(yùn)行能力:可同時(shí)運(yùn)行 1 - 4 塊迷你凝膠,,顯著提高實(shí)驗(yàn)效率,。無(wú)論是少量樣品的初步摸索,,還是大量樣品的高通量分析,都能輕松應(yīng)對(duì) 。例如在蛋白質(zhì)表達(dá)差異分析實(shí)驗(yàn)中,,科研人員能夠同時(shí)對(duì)多個(gè)樣本進(jìn)行電泳,加快實(shí)驗(yàn)進(jìn)程 ,。

  • 廣泛的凝膠兼容性:既適用于 Mini - PROTEAN 預(yù)制膠,,也能配合手工灌制膠使用 。對(duì)于一些需要特殊凝膠配方的實(shí)驗(yàn),,科研人員可以自行配制凝膠進(jìn)行實(shí)驗(yàn),;而在追求便捷性時(shí),也可選用預(yù)制膠,,滿足不同實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景需求 ,。

  • 便捷的操作設(shè)計(jì):擁有的密封機(jī)制,在灌膠過程中能有效防止組裝錯(cuò)誤和漏膠情況 ,。凸輪卡鎖的制膠框操作簡(jiǎn)便,,可在任意平面精準(zhǔn)對(duì)齊玻璃板,且封邊墊條固定在長(zhǎng)玻板上,,保證玻板精確對(duì)齊,,減少操作誤差 。

  1. 精準(zhǔn)穩(wěn)定的電源供應(yīng)器

  • 多種輸出模式:PowerPac Universal 電源供應(yīng)器具備恒流、恒壓,、恒功率以及伏特小時(shí)控制(99000 V - hr)等輸出模式 ??蒲腥藛T可依據(jù)實(shí)驗(yàn)類型,、樣品特性以及凝膠參數(shù)等靈活選擇合適的輸出模式 。比如在核酸電泳中,,恒壓模式較為常用,;而在蛋白質(zhì)電泳的某些情況下,,恒功率模式能更好地保證分離效果 ,。

  • 精確的參數(shù)控制:電壓輸出范圍為 10 - 500 V,電流輸出范圍 0.01 - 2.5 A,,功率輸出范圍 1 - 500 W ,。能夠精確設(shè)定電泳所需的各項(xiàng)參數(shù),確保實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性 ,。同時(shí),,可定時(shí) 1 分鐘到 99 小時(shí) 59 分鐘,滿足不同實(shí)驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)需求 ,。

  • 人性化功能設(shè)計(jì):儲(chǔ)存 9 個(gè)方法,,每個(gè)方法最多可設(shè)置 9 個(gè)步驟,方便科研人員保存常用實(shí)驗(yàn)程序,,下次使用時(shí)直接調(diào)用,,節(jié)省設(shè)置時(shí)間 。具備暫停 / 繼續(xù)功能,,運(yùn)行過程中可隨時(shí)改變已編程參數(shù),,無(wú)需重新設(shè)定時(shí)間,提高實(shí)驗(yàn)操作的靈活性 ,。

  1. 安全可靠的系統(tǒng)

  • 全面的安全防護(hù):具備空載監(jiān)測(cè),、荷載突變監(jiān)測(cè)、過載 / 短路監(jiān)測(cè),、地面漏電保護(hù)以及過壓保護(hù)等多重安全防護(hù)機(jī)制 ,。保障實(shí)驗(yàn)人員操作安全,防止因設(shè)備故障引發(fā)安全事故,,同時(shí)保護(hù)儀器設(shè)備免受損壞,,延長(zhǎng)使用壽命 。

  • 符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn):通過 CE,、EN - 61010 等安全標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)證,,產(chǎn)品質(zhì)量和安全性得到國(guó)際認(rèn)可,讓科研人員使用更放心 。

使用方法
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
  1. 設(shè)備檢查:收到套裝后,,仔細(xì)檢查電泳槽,、電源供應(yīng)器及配件是否齊全,有無(wú)損壞或缺失 ,。查看電泳槽外觀有無(wú)裂縫,、變形,電極是否完好,;電源供應(yīng)器外殼是否有破損,,顯示屏是否正常 。若發(fā)現(xiàn)問題,,及時(shí)聯(lián)系供應(yīng)商處理 ,。

  1. 凝膠制備(以手工灌制聚丙烯酰胺凝膠為例)

  • 準(zhǔn)備試劑:依據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,準(zhǔn)備好丙烯酰胺,、甲叉雙丙烯酰胺,、Tris - HCl 緩沖液、過硫酸銨(APS),、四甲基乙二胺(TEMED),、去離子水等試劑 。所有試劑應(yīng)保證純度和質(zhì)量,,避免因試劑問題影響凝膠聚合和實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ,。

  • 計(jì)算配方:根據(jù)所需凝膠濃度和體積,精確計(jì)算各試劑用量 ,。例如,,配制 10% 的聚丙烯酰胺凝膠,假設(shè)總體積為 10 ml,,需計(jì)算出丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺混合液(一般為 30% 的儲(chǔ)備液),、Tris - HCl 緩沖液(如 1.5 M,pH 8.8 用于分離膠,;1 M,,pH 6.8 用于濃縮膠)、去離子水,、APS(一般為 10% 的溶液)和 TEMED 的用量 ,。

  • 配制凝膠溶液:先將丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺混合液、Tris - HCl 緩沖液,、去離子水按比例加入干凈的容器中,,充分?jǐn)嚢杈鶆?。然后,,在灌膠前,,加入適量的 APS 和 TEMED,迅速輕輕攪拌,引發(fā)凝膠聚合反應(yīng) ,。注意,,APS 和 TEMED 加入后,凝膠會(huì)在短時(shí)間內(nèi)開始聚合,,需盡快進(jìn)行下一步操作 ,。

  1. 樣品處理

  • 蛋白質(zhì)樣品:若進(jìn)行蛋白質(zhì)電泳,將蛋白質(zhì)樣品與適量的上樣緩沖液(如含 SDS,、β - 巰基乙醇、溴酚藍(lán)等的緩沖液)按 1:1 或其他合適比例混合 ,。在 100°C 加熱 3 - 5 分鐘,,使蛋白質(zhì)變性,破壞其高級(jí)結(jié)構(gòu),,使其帶上負(fù)電荷并以線性形式存在,,便于后續(xù)在凝膠中按分子量大小分離 。加熱后,,短暫離心,,將樣品收集至管底 。

  • 核酸樣品:對(duì)于核酸樣品,,根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,可選擇是否進(jìn)行酶切、PCR 擴(kuò)增等預(yù)處理 ,。同樣與核酸上樣緩沖液(含甘油,、溴酚藍(lán)等)混合,甘油可增加樣品密度,,便于加樣時(shí)樣品沉入加樣孔 ,。

組裝電泳槽與灌膠
  1. 組裝電泳槽

  • 將制膠架放置在平穩(wěn)桌面,確保其穩(wěn)定 ,。抬起制膠架兩側(cè)的羽狀開關(guān),,放開卡門,平放制膠架 ,。

  • 先將厚玻璃平板放入制膠架,,再放入兩側(cè)墊片,最后放入帶凹型的玻璃平板 ,。合上卡門,,同時(shí)按壓兩側(cè)羽狀開關(guān),直至聽到 “咔嚓" 聲,,確??ㄩT緊閉,玻璃平板安裝牢固 。

  1. 灌分離膠:用移液器將配制好的分離膠溶液緩慢加入制膠玻板之間,,動(dòng)作要平穩(wěn),,避免產(chǎn)生氣泡 。加至液面達(dá)到卡門邊框下緣線處 ,。隨后,,用移液器小心地將去離子水沿水平方向緩慢加在分離膠液面上,形成水封層 ,。水封層可防止膠液蒸發(fā),,維持膠面平整,并使凝膠聚合更均勻 ,。一般情況下,,分離膠在室溫下聚合需 30 - 60 分鐘 。

  1. 灌濃縮膠:分離膠聚合完成后,,倒掉水封層的去離子水,,用濾紙輕輕吸去殘液,但注意不要碰到膠面 ,。在玻板中加滿濃縮膠溶液,,輕輕插入合適的梳子(如 10 - well 梳子),梳子的厚面向?qū)嶒?yàn)者,,插入過程要緩慢且保持水平,,避免產(chǎn)生氣泡 。濃縮膠在室溫下聚合通常需要 30 分鐘左右 ,。聚合完成后,,小心除去梳子 。

安裝電泳槽與加樣
  1. 安裝電泳槽:按壓電泳槽夾具的開關(guān),,松開卡門 ,。將帶有凝膠的玻璃夾板放入電泳槽內(nèi),注意兩玻璃夾板的凹玻板均應(yīng)與電泳槽內(nèi)芯接觸 ,。若僅電泳一塊膠,,另一套玻璃夾板需用提供的有機(jī)玻璃板代替 。

  1. 添加緩沖液:在外水槽加入適量電泳緩沖液,,至槽體一半位置 ,。放正槽體,繼續(xù)加注緩沖液,,讓內(nèi)槽水位超過凹形板的缺口,,但低于方形板的上沿 。注意緩沖液添加過程中要避免產(chǎn)生氣泡,,確保緩沖液均勻分布 ,。

  1. 加樣:使用微量加樣器或普通加樣槍,,在梳井內(nèi)按預(yù)定順序加入處理好的樣品 。加樣量通常為 10 - 25 μl,,具體可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和樣品濃度調(diào)整 ,。加樣時(shí),將加樣槍頭垂直緩慢插入加樣孔底部,,輕輕推動(dòng)槍栓,,使樣品緩慢沉入加樣孔,避免樣品溢出或產(chǎn)生氣泡 ,。同時(shí),,在相鄰加樣孔中加入 DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn) Marker 或蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn) Marker,用于判斷樣品條帶的大小 ,。

電泳操作
  1. 連接電源:將 PowerPac Universal 電源供應(yīng)器的電源線插入電源插座,,確保接地良好 。用配套的電纜線將電泳槽與電源供應(yīng)器正確連接,,注意正負(fù)極對(duì)應(yīng)(通常紅色為正極,,黑色為負(fù)極) ,。

  1. 設(shè)置參數(shù):打開電源供應(yīng)器開關(guān),,顯示屏亮起 。根據(jù)實(shí)驗(yàn)類型和需求,,設(shè)置電壓,、電流、功率,、時(shí)間等參數(shù) ,。例如,在蛋白質(zhì) SDS - PAGE 電泳中,,濃縮膠階段可設(shè)置電壓為 80 - 100 V,,時(shí)間約 20 - 30 分鐘;分離膠階段將電壓調(diào)至 120 - 150 V,,時(shí)間根據(jù)凝膠濃度和樣品分子量范圍而定,,一般為 60 - 90 分鐘 。若選擇其他輸出模式,,也需相應(yīng)設(shè)置合適參數(shù) ,。設(shè)置完成后,可將該程序保存,,方便后續(xù)相同實(shí)驗(yàn)調(diào)用 ,。

  1. 開始電泳:確認(rèn)參數(shù)設(shè)置無(wú)誤后,按下電源供應(yīng)器上的 “開始" 按鈕,,電泳開始 ,。此時(shí)可觀察到電泳槽內(nèi)有氣泡產(chǎn)生,,表明電流通過 。在電泳過程中,,密切關(guān)注電源供應(yīng)器顯示屏上的參數(shù)變化,,以及電泳槽內(nèi)樣品指示劑(如溴酚藍(lán))的遷移情況 。正常情況下,,指示劑應(yīng)勻速向正極移動(dòng) ,。若發(fā)現(xiàn)參數(shù)異常波動(dòng)或指示劑遷移異常,應(yīng)立即停止電泳,,檢查設(shè)備連接,、緩沖液、凝膠等是否存在問題 ,。

  1. 結(jié)束電泳:當(dāng)樣品指示劑遷移至玻璃板下緣附近,,或達(dá)到設(shè)定的電泳時(shí)間,電泳結(jié)束 ,。按下電源供應(yīng)器上的 “停止" 按鈕,,關(guān)閉電源 。小心取出電泳槽內(nèi)的玻璃夾板,,準(zhǔn)備后續(xù)凝膠處理 ,。

凝膠染色與分析
  1. 染色

  • 蛋白質(zhì)凝膠染色:常用考馬斯亮藍(lán)染色法或銀染法 ??捡R斯亮藍(lán)染色相對(duì)簡(jiǎn)便,,將凝膠小心取出放入染色液(如 0.1% 考馬斯亮藍(lán) R - 250 溶于 40% 甲醇和 10% 乙酸的溶液)中,室溫下振蕩染色 1 - 2 小時(shí) ,。染色后,,用脫色液(一般為 40% 甲醇和 10% 乙酸的溶液)脫色,直至背景清晰,,蛋白質(zhì)條帶顯現(xiàn) ,。銀染法則靈敏度更高,但操作較為復(fù)雜,,需依次進(jìn)行固定,、敏化、銀染,、顯影等步驟,,具體操作可參考相關(guān)實(shí)驗(yàn)手冊(cè) 。

  • 核酸凝膠染色:通常使用核酸染料如 EB(溴化乙錠),、SYBR Green 等 ,。將凝膠放入含有適量核酸染料的染色液中,室溫下染色 15 - 30 分鐘 ,。EB 具有強(qiáng)致癌性,,操作時(shí)需做好防護(hù),,在通風(fēng)櫥中進(jìn)行 。SYBR Green 相對(duì)安全,,且靈敏度較高 ,。染色后,用去離子水沖洗凝膠,,去除表面多余染料 ,。

  1. 分析:染色后的凝膠可通過凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察和分析 。將凝膠放入成像系統(tǒng)中,,選擇合適的光源和濾鏡(根據(jù)所使用的染料選擇),,拍攝凝膠圖像 。通過圖像分析軟件,,可對(duì)條帶進(jìn)行定量分析,,如計(jì)算條帶的光密度值、分子量大小,、相對(duì)表達(dá)量等 ,。在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中,可通過分析不同樣品蛋白質(zhì)條帶的差異,,篩選出差異表達(dá)的蛋白質(zhì),;在核酸研究中,可判斷 PCR 產(chǎn)物的大小,、純度等 ,。

注意事項(xiàng)
  1. 設(shè)備維護(hù):實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,,及時(shí)清洗電泳槽和配件 ,。先用去離子水沖洗電泳槽內(nèi)外壁,去除殘留的緩沖液和凝膠碎片 ,。對(duì)于難以清洗的污漬,,可使用溫和的清潔劑,但要避免使用強(qiáng)腐蝕性試劑,,防止損壞電泳槽 ,。清洗后,用干凈的布擦干或自然晾干 ,。定期檢查電源供應(yīng)器的電源線,、電纜線是否有破損,電極是否有腐蝕,,如有問題及時(shí)更換 ,。長(zhǎng)時(shí)間不使用設(shè)備時(shí),應(yīng)將電泳槽和電源供應(yīng)器妥善存放,,避免陽(yáng)光直射和潮濕環(huán)境 ,。

  1. 試劑安全:在凝膠制備和樣品處理過程中,,涉及到多種化學(xué)試劑,如丙烯酰胺,、APS,、TEMED、EB 等 ,。這些試劑可能具有毒性,、刺激性或致癌性 。操作時(shí)務(wù)必佩戴手套,、護(hù)目鏡等防護(hù)裝備,,在通風(fēng)良好的環(huán)境中進(jìn)行 。對(duì)于有毒有害試劑,,要嚴(yán)格按照操作規(guī)程使用,,使用后妥善處理,避免污染環(huán)境和危害人體健康 ,。例如,,EB 廢液需經(jīng)過特殊處理后才能排放 。

  1. 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化:不同的樣品和實(shí)驗(yàn)?zāi)康目赡苄枰煌碾娪緱l件 ,。在進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)前,,建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),摸索適合的凝膠濃度,、電壓,、電流、時(shí)間等參數(shù) ,。例如,,對(duì)于分子量較大的蛋白質(zhì),可適當(dāng)降低凝膠濃度,;對(duì)于復(fù)雜的核酸樣品,,可能需要調(diào)整電泳時(shí)間和電壓,以獲得更好的分離效果 ,。同時(shí),,要注意控制實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度,溫度過高可能導(dǎo)致凝膠變形,、條帶擴(kuò)散,,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果 。

  1. 加樣注意要點(diǎn):加樣時(shí)要確保加樣槍頭垂直插入加樣孔底部,,避免劃破凝膠 ,。加樣量要準(zhǔn)確且適中,加樣過多可能導(dǎo)致條帶擴(kuò)散,、拖尾,;加樣過少則條帶不清晰,,影響分析 。若使用多通道加樣槍,,要保證每個(gè)通道加樣量一致 ,。加樣過程中若產(chǎn)生氣泡,應(yīng)及時(shí)排除,,否則氣泡會(huì)干擾樣品遷移,,使條帶出現(xiàn)異常 。

  1. 安全用電:電源供應(yīng)器為電泳提供電力,,操作時(shí)要確保其接地良好,,防止觸電事故 。在連接和斷開電纜線時(shí),,務(wù)必先關(guān)閉電源供應(yīng)器 ,。不要在潮濕環(huán)境中使用電源供應(yīng)器,避免水濺入設(shè)備內(nèi)部引發(fā)短路或其他故障 ,。若發(fā)現(xiàn)電源供應(yīng)器有異常發(fā)熱,、冒煙,、異味等情況,,應(yīng)立即切斷電源,,并聯(lián)系專業(yè)維修人員檢查維修 ,。

常見問題及解決方法
  1. 凝膠聚合異常

  • 原因:可能是試劑過期或質(zhì)量不佳,如 APS 失效,、丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺不純,;TEMED 用量不足或過多,;溫度過低也可能影響聚合速度 ,。

  • 解決方法:更換新鮮的試劑,,嚴(yán)格按照配方準(zhǔn)確量取各試劑 。根據(jù)溫度適當(dāng)調(diào)整 TEMED 用量,,溫度較低時(shí)可適當(dāng)增加 TEMED 量 ,。若凝膠長(zhǎng)時(shí)間不聚合,,可嘗試將其放置在 37°C 溫箱中促進(jìn)聚合 ,。

  1. 條帶模糊或拖尾

  • 原因:樣品處理不當(dāng),如蛋白質(zhì)未變性,、核酸樣品有雜質(zhì),;加樣量過多;凝膠濃度不合適,;電泳電壓過高或時(shí)間過長(zhǎng),;緩沖液使用次數(shù)過多,離子強(qiáng)度改變 ,。

  • 解決方法:優(yōu)化樣品處理步驟,,確保蛋白質(zhì)充分變性,,對(duì)核酸樣品進(jìn)行進(jìn)一步純化 。減少加樣量,,調(diào)整至合適范圍 ,。根據(jù)樣品分子量選擇合適的凝膠濃度 。降低電泳電壓或縮短時(shí)間,,摸索最佳電泳條件 ,。及時(shí)更換新鮮的緩沖液 。

  1. 電泳過程中電流異常

  • 原因:電極連接不良,;電泳槽內(nèi)緩沖液不足或干涸,;凝膠有裂縫或破損;電源供應(yīng)器故障 ,。

  • 解決方法:檢查電極連接是否牢固,,重新連接電纜線 。添加適量緩沖液,,確保電泳槽內(nèi)緩沖液充足 ,。若凝膠有問題,重新制備凝膠 ,。如懷疑電源供應(yīng)器故障,,聯(lián)系 Bio - Rad 技術(shù)支持人員進(jìn)行維修或更換 。

  1. 染色后條帶不清晰

  • 原因:染色時(shí)間過短或脫色過度,;染色液濃度不合適,;凝膠在染色前未充分清洗,殘留雜質(zhì)影響染色效果 ,。

  • 解決方法:適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間或縮短脫色時(shí)間 ,。調(diào)整染色液濃度,按照說明書要求配制 ,。在染色前,,用去離子水充分沖洗凝膠,去除殘留的緩沖液和雜質(zhì) ,。

通過正確使用 Bio - Rad 1658026 垂直通用電泳系統(tǒng)套裝,,并嚴(yán)格遵循上述操作步驟和注意



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