寡核苷酸的分析與分離

合成寡核苷酸和DNA片段被應(yīng)用于迅速發(fā)展的應(yīng)用領(lǐng)域,，包括作為主體或雜交探針用于治療性制劑,。沃特世寡核苷酸分離技術(shù)(OST：Oligonucleotide Separation Technology)基于BEH雜化顆粒的反相色譜柱，以及Gen-Pak離子交換柱,，應(yīng)對各種高分辨分析與實驗室規(guī)模分離挑戰(zhàn)所需,，包括涉及各種DNA和RNA品種。

寡核苷酸分析柱 — 異乎尋常的高分辨率

沃特世寡核苷酸色譜柱裝有鍵合了C18的第二代雜化技術(shù)BEH顆粒,。對去三苯甲基(detritylated,，或稱脫保護)的合成寡核苷酸樣品的分離，基于成熟的離子對反相色譜法,。

沃特世提供1.7 μm UPLC顆?；?.5 μm HPLC顆粒，裝填以各種不同色譜柱規(guī)格,，從而靈活滿足各種實驗室規(guī)模分離或分析的不同需求,，并能實現(xiàn)異乎尋常的樣品分辨率和的色譜柱使用壽命,。此外，沃特世的制造和質(zhì)控測試程序,，有助于確保批次之間與柱之間的性能的*性,，而無論應(yīng)用的難度有多高。

分離效率相當于或優(yōu)于PAGE,、CGE,、或離子交換HPLC方法
可從去三苯甲基(脫保護)的全長產(chǎn)物中分辨出失敗序列
可放大的柱規(guī)格，滿足實驗室規(guī)模的分離需求
超長的色譜柱使用壽命,，降低單次分析或分離成本
經(jīng)MassPREP OST標準品質(zhì)控測試,，幫助確保性能穩(wěn)定

杰出的色譜柱壽命
在這些苛刻的分離條件下，填充以BEH技術(shù)顆粒的沃特世寡核苷酸色譜柱顯示出引人注目的柱壽命,，同時還具有并保持的分離性能,。而在相同的苛刻分離條件下，傳統(tǒng)硅膠基質(zhì)色譜柱的使用壽命顯著縮短,。

干擾RNA寡核苷酸的UPLC/MS分析

RNA干擾(RNAi)機制的發(fā)現(xiàn)現(xiàn)在被廣泛用于靜默目標基因表達,，這推動了對小分子干擾RNA(siRNA)分析的需求。為滿足對20-25個核苷酸的小分子干擾RNA(siRNA)進行耐用的,、快速的,、靈敏的分析的需求，沃特世開發(fā)了一個UPLC/MS方法,，運用了UPLC OST色譜柱和Synapt HDMS
質(zhì)譜儀,。
采集準確質(zhì)量可對5’-截斷寡聚體(寡核苷酸合成過程所產(chǎn)生的失敗序列)以及其它一些雜質(zhì)峰進行分配。質(zhì)譜圖中的質(zhì)量的每個峰均使用MaxEnt 1軟件進行去卷積化,。圖2給出了推測性的5’-端失敗產(chǎn)物,。對寡核苷酸母體的幾乎完整序列均進行了解釋。質(zhì)譜分析還顯示除了目標21-mer RNAi序列以外,，還存在一個額外的尿苷單核苷酸,。