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不想挑晶體,?原位晶體篩選,測試和結(jié)構(gòu)解析方法

閱讀:1671      發(fā)布時間:2020-8-4
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  X射線晶體衍射儀經(jīng)歷了快速發(fā)展的10年,,我們的光源越來越強(qiáng),,探測器越來越快,數(shù)據(jù)處理越來越智能,。儀器的進(jìn)步,,大大提高了我們的晶體數(shù)據(jù)收集的效率和成功率,讓我們有更多的時間研究更深入的問題,。然而好的晶體永遠(yuǎn)都是一位的尤其對于蛋白質(zhì)晶體來說,,獲得能夠衍射的晶體,仍然是主要的瓶頸之一,。通常,,為了檢驗(yàn)蛋白質(zhì)晶體的衍射質(zhì)量,我們需要從晶體板上挑出晶體,,加上防凍劑,,冷凍,放到衍射儀上,,然后測試,。然而所有這些步驟都有可能損壞晶體。低溫晶體篩選不僅耗時耗力,,而且我們沒有辦法避免這些操作過程對晶體衍射質(zhì)量的影響,。

 

  幾年前,在同步輻射出現(xiàn)了原位晶體學(xué)的方法:快速,,方便,,可以直接在晶體生長環(huán)境下研究晶體的衍射。原位的方法避免了低溫晶體學(xué)在晶體轉(zhuǎn)移過程中對晶體的損害。同樣在室內(nèi)衍射儀上,,Bruker D8 VENTURE-ISX STAGE同樣完美地實(shí)現(xiàn)了原位晶體篩選評估:

 

  1.切換方便,,5分鐘內(nèi)即可完成樣品臺的安裝和拆卸

  2.軟件控制,只需要鼠標(biāo)點(diǎn)擊即可快速對整個晶體板的每個結(jié)晶空進(jìn)行查看

  3.自動多樣品隊列衍射實(shí)驗(yàn)

  4.快速表征晶胞參數(shù),,識別晶體以及后續(xù)的數(shù)據(jù)收集

 

 ▲ ISX Stage mounted on D8 VENTURE

 

實(shí)驗(yàn)案例:GlucoseIsomerases晶體篩選和測試

 

儀器配置:D8VENTURE IµS 3.0,,PHOTONII,ISX STAGE

樣品:GlucoseIsomerases結(jié)晶初篩48孔板,,96個drop

總時間:1h(查看96個drop:30min,;衍射28個晶體:30min;晶胞表征:10min)

 

1

晶體查看,,挑選

 

 

 ▲ ISX Stage Software Control

 

2

確定晶體篩選隊列

 

 ▲ 挑選用于自動篩選的晶體

 

3

自動隊列晶體衍射實(shí)驗(yàn)

 

 

 ▲ 30min,,6個孔,28個晶體樣品篩選結(jié)果

 

4

數(shù)據(jù)收集

 

室溫下,,原位對4顆晶體進(jìn)行數(shù)據(jù)收集,,然后合并數(shù)據(jù),使用MR解析結(jié)構(gòu),。

 

 

 ▲ 原位常溫數(shù)據(jù)采集和結(jié)構(gòu)解析

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