儲(chǔ)運(yùn)條件

-20℃

產(chǎn)品組成

All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑

產(chǎn)品簡介

All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase) 是一款高效,、便捷,、減少污染的高質(zhì)量一鏈cDNA 合成試劑盒,，包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反應(yīng)Buffer、RNA 酶抑制劑,、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和隨機(jī)引物等一鏈cDNA 合成所需的所有組分,，僅需加入RNA 模板和水即可開始反應(yīng)。All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase) 作為升級(jí)后的一鏈cDNA 合成試劑盒,，15 分鐘內(nèi)最長可獲得12 kb cDNA,，產(chǎn)物可用于qPCR、普通PCR 等實(shí)驗(yàn),。從組織或細(xì)胞中提取的RNA 往往殘留基因組DNA 污染，如果反轉(zhuǎn)錄前不做去除處理,，下游進(jìn)行qPCR 反應(yīng)時(shí)基因組DNA 與cDNA會(huì)同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增,，尤其是引物設(shè)計(jì)在同一外顯子上時(shí)，影響定量準(zhǔn)確性,。本試劑盒所采用的dsDNase 能夠特異性消化雙鏈DNA 或DNARNA雜合雙鏈中的DNA,，并且具有熱敏感性，在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度下即可快速不可逆地失活,。與傳統(tǒng)使DNase I 去除基因組DNA 污染的方法相比,，dsDNase 無需額外加入EDTA 進(jìn)行失活，不僅節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間,，而且降低了對(duì)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的抑制,。可依據(jù)基因組DNA 污染嚴(yán)重程度,，選擇去基因組DNA 污染與反轉(zhuǎn)錄分開進(jìn)行,，或者去基因組DNA 污染與反轉(zhuǎn)錄一步進(jìn)行的操作方法。

使用方法

針對(duì)基因組DNA 含量低的RNA 樣品（推薦方案）

All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑

① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：

a. 推薦使用試劑盒提取的高質(zhì)量RNA 作為模板,。

② 輕柔吸打混勻,，瞬離；

③ 37℃溫育2 min,，以去除基因組DNA 污染,；

④ 55℃溫育15 min；

⑤ 反應(yīng)結(jié)束后,，85℃溫育2 min 以終止反應(yīng),；

⑥ 迅速將獲得的cDNA 置于冰上，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),；或立即保存于-20℃,。

針對(duì)基因組DNA 含量高RNA 樣品

1. 基因組DNA 污染去除

① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：

a. 推薦采用試劑盒提取的RNA 作為模板。

② 輕柔吸打混勻,，瞬離,；

③ 37℃溫育2 min,，以去除基因組DNA 污染；

注：若RNA 中基因組DNA 污染嚴(yán)重,，可適當(dāng)延長37℃溫育時(shí)間至5 min,。

④ 65℃溫育2 min，使dsDNase 失活,，然后置于冰上,。

2. 第一鏈cDNA 合成

① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：

② 輕柔吸打混勻，瞬離,；

③ 50℃溫育15 min,；

注：若目標(biāo)RNA 不含Poly(A) 結(jié)構(gòu)，可預(yù)先25℃溫育10 min,。

④ 反應(yīng)結(jié)束后,，85℃溫育2 min，以終止反應(yīng),；

⑤ 將獲得的cDNA 溶液置于冰上,，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注：cDNA 溶液置于-20℃儲(chǔ)存,，建議不超過1 周,；置于-80℃可長期儲(chǔ)存。

注意事項(xiàng)

預(yù)混液中已經(jīng)包含Oligo(dT)20VN 和隨機(jī)引物,，不僅適用于包含Poly(A) 結(jié)構(gòu)的真核生物mRNA,，也適用于不含Poly(A) 結(jié)構(gòu)的原核生物RNA、真核生物rRNA 和tRNA 等模板,，但不適用于miRNA 等小RNA 模板,。

美國Azaood公司成立于2004年，是一家開發(fā)和生產(chǎn)用于生命科學(xué)研究,、診斷和生物技術(shù)應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶,、蛋白質(zhì)、核酸和細(xì)胞分離試劑盒,、胎牛血清的,；Azood公司是通過了ISO9001認(rèn)證的主要制造商，可以滿足從研究到大規(guī)模批量生物加工和OEM應(yīng)用與要求的公司,。