美國(guó) Biozellen-3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒 2025 版詳細(xì)介紹

產(chǎn)品基本信息

本公司今日?qǐng)?bào)道：

• 中文名稱：3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒

• 英文名稱：3D cell culture      Kit

• 貨號(hào)：KC7186

• 保存條件：室溫

產(chǎn)品概述

本 3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒所包含的生物活性凝膠,，能夠高度模擬活體內(nèi)三維組織的微環(huán)境與形態(tài)結(jié)構(gòu),。它為細(xì)胞的體外培養(yǎng)以及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供了近似于體內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)的三維立體微環(huán)境，有力支持各種細(xì)胞的三維生長(zhǎng),。

該凝膠的主要成分是多糖和人工多肽,，具有諸多顯著優(yōu)勢(shì)。其不含抗原物質(zhì)和動(dòng)物源性成分,，從根本上杜絕了免疫原性的風(fēng)險(xiǎn),。產(chǎn)品成分穩(wěn)定且明確，批次間差異極小,，這使得實(shí)驗(yàn)具有ji高的可重復(fù)性,。

在操作方面，本產(chǎn)品極為簡(jiǎn)便,。僅需在室溫下操作,，無需像其他產(chǎn)品那樣在冰上進(jìn)行復(fù)雜的處理。而且,，它可以直接使用,，無需進(jìn)行稀釋或額外添加其他成分。僅需簡(jiǎn)單的 2 個(gè)步驟,，經(jīng)過 5-10 分鐘的孵育,，即可成功形成細(xì)胞 - 凝膠的三維結(jié)構(gòu)。

此外,，該凝膠對(duì)剪切力敏感,，能夠直接進(jìn)行體內(nèi)原位注射,，無論是與細(xì)胞混合還是不混合的情況下，都能無縫對(duì)接體內(nèi)外實(shí)驗(yàn),，為開展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提供了極大的便利,。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后，還可回收培養(yǎng),。試劑盒附贈(zèng)溫和裂解液，裂解或降解后的成分僅為單糖和氨基酸,，對(duì)細(xì)胞無任何不良影響,。

從觀察角度來看，該凝膠具有高透光性和高通透性的特點(diǎn),，方便研究人員通過熒光觀察,、顯色觀察等多種方式對(duì)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)跟蹤觀察。

操作說明書

1. 預(yù)熱凝膠液：使用前,，將凝膠液預(yù)熱至 37℃,，為后續(xù)與細(xì)胞懸液的混合做好準(zhǔn)備。

2. 混合凝膠液與細(xì)胞懸液：在離心管中,，將凝膠液和細(xì)胞懸液輕輕混勻,。可輕柔快速地進(jìn)行斡旋操作,，時(shí)間控制在 1 分鐘內(nèi),，重復(fù) 1-2 次。特別注意,，在凝膠和細(xì)胞混合時(shí),，必須嚴(yán)格按照說明書的要求，先吸取凝膠,，再往凝膠中加入細(xì)胞懸液,，然后進(jìn)行混勻，順序絕對(duì)不可顛倒,。同時(shí),，斡旋時(shí)間不能超過 1 分鐘，斡旋次數(shù)不能超過 3 次,，因?yàn)檫^度斡旋會(huì)破壞細(xì)胞膜,，并增加凝膠中的氣泡，從而嚴(yán)重影響細(xì)胞培養(yǎng)效果,。建議的終細(xì)胞濃度為 4.2x10^5/ml-1x10^6/ml,。不同的培養(yǎng)體系可參照以下表格確定各成分的體積：
        | 孔板類型 | 凝膠液體積 | 細(xì)胞懸液體積 | 培養(yǎng)基體積 |
        | ---- | ---- | ---- | ---- |
        | 96 孔板 | 30ul / 孔 | 30ul      / 孔 | 80ul / 孔 |
        | 24 孔板 | 150ul / 孔 |      150ul / 孔 | 400ul / 孔 |
        | 12 孔板 | 300ul / 孔 |      300ul / 孔 | 800ul / 孔 |
        | 6 孔板 | 600ul / 孔 | 600ul      / 孔 | 1600ul / 孔 |

3. 潤(rùn)洗與鋪展：用 1xpbs 潤(rùn)洗細(xì)胞培養(yǎng)板，建議至少在凝膠形成前 20 分鐘進(jìn)行潤(rùn)洗操作,。潤(rùn)洗后,，快速將凝膠細(xì)胞混合物貼壁加入培養(yǎng)板中,，并在四周輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板，使凝膠細(xì)胞混合物均勻鋪展,。

4. 凝膠形成：將培養(yǎng)板置于 37℃環(huán)境下孵育 5-30 分鐘,，以形成穩(wěn)定的凝膠結(jié)構(gòu)。

5. 添加培養(yǎng)液與培養(yǎng)：孵育完成后,，沿孔壁緩慢加入培養(yǎng)液,。隨后，將培養(yǎng)板置于 37℃,、5% CO2 的條件下培養(yǎng) 24 小時(shí),。在此期間，應(yīng)避免晃動(dòng)培養(yǎng)板,，以免破壞凝膠結(jié)構(gòu),。

6. 換液操作：24 小時(shí)后進(jìn)行半換液操作，即用移液槍輕輕吸取上層細(xì)胞培養(yǎng)液的 1/2,，再添加等量的新鮮培養(yǎng)液,。此后，可根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況進(jìn)行正常換液,。特別注意,，shou次換液時(shí)一定要緊貼培養(yǎng)孔壁，小心吸取,，避免吸掉剛貼附好的細(xì)胞,。

實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的問題及解決方法

1. 氣泡問題：若在運(yùn)輸過程中出現(xiàn)氣泡，可將凝膠放置在 4℃冰箱中,，氣泡可自行消除,。如需快速消除氣泡，可采用微波加熱 30s 的方法,。為避免在使用過程中產(chǎn)生氣泡,，建議使用 1mL 無菌注射器（去針頭使用）輕吸凝膠注入 EP 管中，也可以使用經(jīng) PBS 潤(rùn)洗的 1mL 槍頭吸取凝膠,，再將細(xì)胞懸液加入后上下輕輕吹打進(jìn)行混勻,。

2. 細(xì)胞適應(yīng)問題：對(duì)于 2D 培養(yǎng)的細(xì)胞接種到凝膠中，通常需要 2-4 天的時(shí)間來適應(yīng)凝膠的三維環(huán)境,。在這期間,，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)可能會(huì)比較保守，多呈圓形,。之后,，細(xì)胞會(huì)逐漸恢復(fù)正常生長(zhǎng)，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),。

3. 細(xì)胞遷移問題：為避免一些類型的細(xì)胞從凝膠中遷移到培養(yǎng)皿底部貼壁,，在鋪板前,，可先將孔板包被一層薄薄的凝膠。具體方法是將凝膠和培養(yǎng)液按照 1:1 的體積比配置,，鋪在孔板底部,，待其凝固之后，再鋪凝膠細(xì)胞混合液,。

細(xì)胞收集與再培養(yǎng)

1. 回收凝膠中的細(xì)胞：棄掉培養(yǎng)液,，并用裂解液沖洗培養(yǎng)孔板。加入凝膠液 5 倍體積的裂解液,，輕輕吹打數(shù)次,，在室溫下裂解約 10 分鐘，使凝膠wan全變成液體狀態(tài),。將混合液收集到離心管中,，用 PBS 沖洗孔板,，并將沖洗液也收集至上述離心管中,。然后，以 1500 rpm      的轉(zhuǎn)速離心 3 分鐘,，即可收集到細(xì)胞,。如果細(xì)胞在凝膠內(nèi)是成團(tuán)生長(zhǎng)的，可以在裂解時(shí)適當(dāng)加大裂解液體積,，并延長(zhǎng)裂解時(shí)間,，以得到分散的單個(gè)細(xì)胞。

問題集

1. 3D 細(xì)胞培養(yǎng)后如何染色,？
        答：3D 細(xì)胞培養(yǎng)后可以直接在膠中進(jìn)行染色,，染色步驟與      2D 培養(yǎng)的細(xì)胞相同，不需要進(jìn)行特殊處理,。

2. 3D 細(xì)胞培養(yǎng)后怎么觀察,？
        答：3D 細(xì)胞培養(yǎng)后可以使用 Confocal 或者熒光倒置顯微鏡進(jìn)行觀察，光學(xué)顯微鏡也可以觀察,，但是由于凝膠是立體結(jié)構(gòu),，可能光學(xué)顯微鏡觀察的效果不會(huì)太理想。

3. 你們的 3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠能進(jìn)行培養(yǎng)嗎,？
        答：可以,。

4. 你們的 3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠使用時(shí)需要使用配套的專用耗材或者儀器嗎？
        答：不需要使用專用耗材和儀器,。采用本試劑盒進(jìn)行 3D 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)所用的耗材和儀器同 2D 培養(yǎng),。

5. 你們的 3D 細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒可以用于細(xì)胞共培養(yǎng)嗎？
        答：可以進(jìn)行細(xì)胞共培養(yǎng),。

6. 你們的 3D 培養(yǎng)凝膠試劑盒是不是只能培養(yǎng)特定的一些細(xì)胞,？
        答：本試劑盒對(duì)細(xì)胞沒有選擇性,，對(duì)大多數(shù)細(xì)胞都是適用的。

7. 你們的 3D 培養(yǎng)凝膠試劑盒和 Matrigel 基質(zhì)膠有何不同,？
        答：Matrigel 基質(zhì)膠主要是由層粘連蛋白,、Ⅳ 型膠原、巢蛋白,、硫酸肝素糖蛋白等組成,，是從腫瘤中提取出來的，成分復(fù)雜,。本試劑盒凝膠主要是由多肽和多糖構(gòu)成,，為全人工合成的，無動(dòng)物源性,。適用 Matrigel 基質(zhì)膠進(jìn)行 3D 培養(yǎng),，其后期染色非常困難，細(xì)胞也無法回收,。使用本試劑盒進(jìn)行 3D 培養(yǎng)后的細(xì)胞可以輕松染色,，并可以在保持細(xì)胞活性的情況下回收細(xì)胞，是您      3D 培養(yǎng)的理想選擇,。

8. 你們的 3D 培養(yǎng)凝膠和軟瓊脂一樣嗎,？
        答：我們的 3D 培養(yǎng)凝膠是人工合成的，其性能大大優(yōu)于軟瓊脂,。

9. 凝膠和細(xì)胞懸液混合這一步,，是否有順序要求？
        答：有,。必須嚴(yán)格按照說明書,，先吸取凝膠到容器中，再往凝膠中加入細(xì)胞懸液,，混勻,。順序不可顛倒。否則不利于形成穩(wěn)定的凝膠結(jié)構(gòu),。

10. 使用中如何吸取凝膠,？
         答：先將槍頭jian端剪掉，用 PBS 潤(rùn)洗,，然后再吸取凝膠,。慢慢松開移液槍的按鈕，按鈕彈回原位之后,，讓槍頭在凝膠液面以下稍多停留一會(huì)兒,，再提槍，轉(zhuǎn)移凝膠到其他容器中。

11. 吸取凝膠與混勻凝膠過程中,，產(chǎn)生的氣泡可否消除,？
         答：吸取與混勻凝膠過程中產(chǎn)生的氣泡不能消除，會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn),，所以,，應(yīng)盡量避免氣泡產(chǎn)生。

12. 怎樣達(dá)到更好的鋪板效果,？
         答：鋪板前,，采用分區(qū)域逐滴滴加的方式，把每一滴凝膠按一定排布次序滴在孔（或皿）的不同區(qū)域,，滴好之后,，用槍頭在凝膠表面輕輕引流，可獲得較為均勻的鋪板結(jié)果,。鋪板后將培養(yǎng)板靜置孵育 5-30min,，期間不要晃動(dòng)培養(yǎng)板。

13. 何時(shí)shou次添加培養(yǎng)液,？
         答：37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育 5-30min 形成穩(wěn)定凝膠結(jié)構(gòu)后即需要添加培養(yǎng)液,。將培養(yǎng)液貼壁緩慢加入孔板中。

14. 培養(yǎng)過程中需要如何換液,？
         答：換液時(shí)注意先將負(fù)壓泵壓力調(diào)低,。最好在培養(yǎng) 48 小時(shí)之后再進(jìn)行shou次換液,。換液時(shí),，棄掉 2/3 左右的舊液即可，留少量舊液以避免吸走凝膠,；對(duì)于生長(zhǎng)快的細(xì)胞,，24h 時(shí)可以換掉一半培養(yǎng)液。shou次換液時(shí)一定要緊貼培養(yǎng)孔壁,，小心緩慢吸取舊液,，避免吸掉剛貼附好的細(xì)胞。添加新液一定要貼壁,、緩慢加入,，以避免沖壞凝膠。此后可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速度,，視培養(yǎng)液的消耗情況來?yè)Q液,。