動物源性DNA檢測試劑盒是為專業(yè)的高通量實驗室設(shè)計的,,但是現(xiàn)在這種試劑盒是適合中低等通量的實驗室使用,這個試劑盒專門為每天需要制備的樣品量達到100個的實驗室而設(shè)計,。
該試劑盒在連接探針末段引入不同長度的標(biāo)簽序列,,獲得長度各異的目的探針連接產(chǎn)物,利用熒光標(biāo)記的通用引物對連接產(chǎn)物進行PCR擴增,,通過熒光毛細管電泳對擴增產(chǎn)物進行電泳分離檢測,,后通過對電泳圖譜的分析獲取各個位點的峰高,進而對樣品目的區(qū)域的拷貝數(shù)進行分析,。
建議使用試劑配套動物基因組DNA提取系列產(chǎn)品,,具體過程詳見產(chǎn)品說明書。剪下所需測試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管,,放置在室溫待解凍后,,離心30秒后揭開封口膜,向每管反應(yīng)液中分別加入5μL模板,,順序為NG,、待測樣品模板。蓋好配套的PCR管蓋后,,渦旋混勻30秒,,離心1分鐘,立即進行PCR擴增反應(yīng),。
1,、需要按試劑準(zhǔn)備中描述的方法,配制好動物源性DNA檢測試劑盒各種組分的工作液,。
2,、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫,,標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品,,建議做復(fù)孔,。
3、從鋁箔袋中取出所需板條,,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4,、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、樣本孔和空白孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,,樣本孔加待測樣本50μL,,空白孔不加。
5,、用封板膜蓋住反應(yīng)板,,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。
6,、除空白孔外,,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,加入過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體100μL,。
7,、揭開封板膜,棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,靜置20s,,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干。
8,、將底物A和B按1:1體積充分混合,,所有孔中加入底物混合液100μL,用封板膜蓋住反應(yīng)板,,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15分鐘,;
9、如此重復(fù)4次,,若使用自動洗板機,,請按洗板機操作程序進行洗板,添加浸泡20秒的程序,,可以提高檢測的精度,。洗板結(jié)束,,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,,充分拍干反應(yīng)板,。