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| 供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 1*10^6 |
|---|---|---|---|
| 主要用途 | 科研用途 |
Toledo 人彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
細(xì)胞介紹
Toledo是1990年從患有彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤(非霍奇金B(yǎng)細(xì)胞)的成年白人女性患者的外周血中分離的B淋巴細(xì)胞系,。經(jīng)過大劑量化liao和骨髓移植后，患者隨后出現(xiàn)腦部淋巴瘤,。盡管細(xì)胞的形態(tài)類似于伯基特淋巴瘤，但細(xì)胞缺乏伯基特淋巴瘤的典型染色體易位,。核型確實(shí)表現(xiàn)出多種染色體畸變。細(xì)胞不表達(dá)表面或細(xì)胞質(zhì)免疫球蛋白,。這些細(xì)胞對 Epstein-Barr 病毒呈陰性,。
細(xì)胞特性
1） 來源：成年白人女性 外周血中分離的B淋巴細(xì)胞
2） 形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣 懸浮生長
3） 含量：>1x106 細(xì)胞數(shù)
4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5）用途：僅供科研使用,。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系,。
（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們,。
2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況,。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完quan培養(yǎng)基6-8mL,，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理,。傳代過程中,，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完quan培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。 收到細(xì)胞后一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
Toledo 人彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備
1） 準(zhǔn)備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%；雙抗,，1%,。
注意：用推薦的wan全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，并分配到T25培養(yǎng)瓶中,。在細(xì)胞回收過程中避免培養(yǎng)基堿度過高非常重要。建議在添加小瓶內(nèi)容物之前,，將含有wan全生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器放入培養(yǎng)箱中至少 15 分鐘,，以使培養(yǎng)基達(dá)到正常 pH 值（7.0 至 7.6）。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL完quan培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，完quan培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完quan培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白mei-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化直至細(xì)胞層分散（通常在 5 至 15 分鐘內(nèi)）以使培養(yǎng)基達(dá)到正常 pH 值（7.0 至 7.6）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，為避免結(jié)塊,，在等待細(xì)胞分離時請勿敲擊或搖動燒瓶來攪動細(xì)胞,。難以分離的細(xì)胞可置于37°C以利于分散。若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的wan全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。
3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用,。
下面T25瓶為例；
1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細(xì)胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清,。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,，標(biāo)注好名稱,、代數(shù)、日期等信息,。
3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。
注意事項(xiàng)
1.收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片,，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*,，200*各一張）,，觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù),。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境,、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),，故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。
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