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266-6 小鼠胰腺腺泡癌細(xì)胞  STR鑒定

細(xì)胞介紹

266-6是從患有胰腺腺泡細(xì)胞腫瘤的小鼠的胰腺中分離出的具有上皮形態(tài)的細(xì)胞系,。用彈性蛋白酶 I/SV-40 T 抗原融合基因誘導(dǎo)腫瘤。細(xì)胞保留部分分化的表型,，并表達(dá)可檢測水平的多種消化酶 mRNA。這些細(xì)胞對卡巴膽jian和縮膽囊素有反應(yīng),，但對 P 物質(zhì),、促胰液素或血管活性腸肽 (VIP) 沒有反應(yīng)。它們帶有彈性蛋白酶 I/新mei素轉(zhuǎn)基因,。

細(xì)胞特性

1） 來源：小鼠  胰腺

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣  貼壁生長

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用,。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系,。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1）收到細(xì)胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完quan培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收,。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完quan培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

266-6 小鼠胰腺腺泡癌細(xì)胞  STR鑒定            

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1） 準(zhǔn)備DMEM （推薦iCell-0001）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗，1%,。

   推薦使用iCell-8280細(xì)胞包被工作液或者使用 0.1% 明膠包被的培養(yǎng)容器來培養(yǎng)該細(xì)胞,。（ATCC-CRL-2151)

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3）凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二．細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL完quan培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，完quan培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完quan培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白mei-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完quan培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用,。

下面T25瓶為例,；

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),，來決定細(xì)胞的凍存密度,。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清,。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,，標(biāo)注好名稱,、代數(shù),、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,，-80度冰箱中過夜,，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。