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RAW264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

細胞描述

此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤,。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性,。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒,，XC斑點形成試驗陰性,?？梢园嬛行约t并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖?？梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞,。LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。

細胞特性

1） 來源：鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；單核細胞,；巨噬細胞

2） 形態(tài)：不規(guī)則圓形,，紡錘狀,，貼壁細胞,，少量懸浮,。

3） 含量：>1x10^6  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù),。

3）半貼細胞或貼壁不牢（懸?。┘毎篢25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況,，若細胞密度在60%以下,，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完quan培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代,，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收,。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完quan培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。 

RAW264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備DMEM(包含2mM L-谷an酰胺,，0.11g / L丙tong酸鈉) (推薦iCell-0001)培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %；P/S青mei素-鏈mei素 1%,。

2） 注意事項：

（a）在細胞生長的初始階段,，細胞以貼壁的形式生長并呈現(xiàn)出長方體的形態(tài)和有“偽足"延伸,。隨著培養(yǎng)時間的增加,，細胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長,。細胞密度達到一定的程度，會有細胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中，鏡下觀察會發(fā)現(xiàn)懸浮和貼壁的細胞會同時出現(xiàn),。

（b）該細胞傳代時不需要用yi酶消化,。傳代時,，用無菌細胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細胞刮落,，收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中,。

（c）該細胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形,。當(dāng)細胞密度較大時,，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起,，有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的，在傳代時應(yīng)收集起來,，離心后細胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng),。（d）血清質(zhì)量差異可能引起細胞貼壁能力變化，應(yīng)選用高質(zhì)量的胎牛血清,。

3） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

4） 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細胞處理：

1）凍存細胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL完quan培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，完quan培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完quan培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞,，傳代可以參考以下方法：

該細胞用細胞刮鏟替代yi酶來對細胞進行處理。用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養(yǎng)表面將細胞刮落，收集細胞后離心去上清,，重懸后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶內(nèi),。收貨后第一次傳代1:2進行，后續(xù)可以根據(jù)實際的情況以1:2~1:4的比例進行傳代,。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。

下面T25瓶為例；

1. 1,，細胞用細胞刮鏟替代yi酶來對細胞進行處理,。用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養(yǎng)表面將細胞刮落，收集細胞,。

2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,，標(biāo)注好名稱、代數(shù),、日期等信息,。

將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜,，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。