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CCRF-CEM 人急性淋巴細胞白血病細胞介紹

G.E. Foley 等人建立了類淋巴母細胞細胞株CCRF-CEM,。細胞是1964年11月從一位四歲白人女性急性淋巴細胞白血病患者的外周血白血球衣中得到,。

細胞特性

1） 來源：白血病, 急性淋巴細胞白血病, 外周血, T淋巴母細胞

2） 形態(tài)：淋巴母細胞，懸浮生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體,、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系,。

細胞用途：僅供科研使用。

CCRF-CEM 人急性淋巴細胞白血病細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行,，能準(zhǔn)確判斷細胞的傳代密度,。看細胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下,，同時給剛收到的細胞拍照,，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù),。

3） 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代 。

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至6ml,。

換液可以通過添加新鮮培養(yǎng)基來維持，每2 - 3天加入新鮮培養(yǎng)基(按體積增加20%至30%),；另一種方法是,，可以通過離心，然后在2到3×105的活細胞/mL中進行再懸浮,。維持細胞密度在2至3×105和1到2×106的活細胞/毫升之間,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例,；

1,，細胞凍存時，取上清,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

2，4min ,，1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%,，細胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識,。

3，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：

一,、原代細胞服務(wù)
      各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源；
      多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源,；
      原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑,、kit、培養(yǎng)基添加劑等,；
      原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實驗外包服務(wù),；

二、細胞株/系服務(wù)
      細胞株/系培養(yǎng),、增殖,、凍存和相關(guān)說明書；
      細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo),；
      細胞系培養(yǎng)基,、添加劑、血清及相關(guān)生長因子,、試劑等,；

三、iPS細胞
      iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層在）,；
      iPS細胞增殖及冷凍保存,；
      iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習(xí)；
      新藥及實驗儀器上市前評估,；

四,、技術(shù)外包服務(wù)：各類細胞生物學(xué)實驗、分子生物學(xué)實驗,、顯微鏡拍照服務(wù)等

五,、其他：根據(jù)客戶需要定制服務(wù)等