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REH 人急性非B非T淋巴細胞白血病細胞特性

1） 來源：白血病

2） 形態(tài)：淋巴母細胞樣，懸浮生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸,，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇,；

（2）存活細胞,，收到后應繼續(xù)生長,，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用,。

REH 人急性非B非T淋巴細胞白血病細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行,，能準確判斷細胞的傳代密度,。看細胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下,，同時給剛收到的細胞拍照，（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據。

3） 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代 。  

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640（推薦iCell-128-0002 含NaHCO3 1.5g/L）培養(yǎng)基,；優(yōu)質胎牛血清,，10%；雙抗,，1%,。

2） 注意:這個細胞對1640培養(yǎng)基中碳酸氫na的含量需求是1.5g/L，購買和準備培養(yǎng)基的時候要注意碳酸氫na的含量,。過多的碳酸氫na不利于細胞的生長,。

3） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

4） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至6ml。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

注：di一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據客戶需要自己決定,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為類；

1,，細胞凍存時,，取上清，可使用血球計數板計數,。

2,，4min ，1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO,，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%，細胞密度1-2xE6/ml,，每支凍存管凍存1ml細胞懸液,，注意凍存管做好標識。

3,，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產品和技術服務：

一、原代細胞服務
      各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源,；
      多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源,；
      原代細胞分離和培養(yǎng)相關試劑、kit,、培養(yǎng)基添加劑等,；
      原代細胞相關技術服務和整體實驗外包服務；

二,、細胞株/系服務
      細胞株/系培養(yǎng),、增殖、凍存和相關說明書,；
      細胞系培養(yǎng)過程的技術指導,；
      細胞系培養(yǎng)基、添加劑,、血清及相關生長因子,、試劑等；

三,、iPS細胞
      iPS細胞基礎培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層在）,；
      iPS細胞增殖及冷凍保存；
      iPS基礎培養(yǎng)技術實習；
      新藥及實驗儀器上市前評估,；

四,、技術外包服務：各類細胞生物學實驗、分子生物學實驗,、顯微鏡拍照服務等

五,、其他：根據客戶需要定制服務等