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TF-1 人紅白血病細胞/STR鑒定介紹

該細胞系1987年由Kitamura T等建立,，源于一名35歲日本男性的肝素化骨髓抽取樣本，該患者具有嚴重的全血細胞減少癥,。細胞生長*依賴于IL-3或GM-CSF，對IL-5無反應(yīng),。多種淋巴因子和細胞因子對該細胞都有作用,，如：IL-1、IL-4,、IL-6,、IL-9、IL-11,、IL-13,、CSF、LIF,、NGF,。該細胞不表達血型糖蛋白A和碳酸酐酶I。由該細胞的形態(tài)和細胞化學(xué)特征及珠蛋白基因的組成性表達,，顯示該細胞屬于紅系,。氯高鐵血紅素和δ氨基乙酰丙酸誘導(dǎo)細胞合成血紅蛋白，TPA刺激細胞向巨噬細胞樣細胞分化,。

細胞特性

1） 來源：白血病細胞

2） 形態(tài)：淋巴母細胞,，懸浮生長,，生長過程中會有細胞附在培養(yǎng)瓶壁上

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系,。

細胞用途：僅供科研使用。

TF-1 人紅白血病細胞/STR鑒定接收后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行,，能準確判斷細胞的傳代密度,。看細胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下,，同時給剛收到的細胞拍照,，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù),。

3） 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代 ,。

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1) 準備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,，添加2 ng/ml GM-CSF；雙抗,，1%,。該細胞懸浮生長，生長過程中會有細胞附在培養(yǎng)瓶壁上的現(xiàn)象,。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3）凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度,。

2） 細胞傳代：傳代低密度不少于2xE4/ml；細胞密度保持在3xE4—5xE5/ml,；生長密度zui高不超過7xE5/ml,。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3） 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。懸浮細胞凍存時,，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘,，少量保存上清液（防止細胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中,，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存,。

下面T25瓶為例；

1,，細胞凍存時,，取上清，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

2,，4min ，1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%,，細胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液,，注意凍存管做好標識,。

3，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：

一,、原代細胞服務(wù)
       各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源；
       多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源,；
       原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑,、kit、培養(yǎng)基添加劑等,；
       原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實驗外包服務(wù),；

二、細胞株/系服務(wù)
       細胞株/系培養(yǎng),、增殖,、凍存和相關(guān)說明書,；
       細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo)；
       細胞系培養(yǎng)基,、添加劑,、血清及相關(guān)生長因子、試劑等,；

三,、iPS細胞
       iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層在）；
       iPS細胞增殖及冷凍保存,；
       iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習(xí),；
       新藥及實驗儀器上市前評估；

四,、技術(shù)外包服務(wù)：各類細胞生物學(xué)實驗,、分子生物學(xué)實驗、顯微鏡拍照服務(wù)等

五,、其他：根據(jù)客戶需要定制服務(wù)等